赵慧
- 作品数：55 被引量：86H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 西尼罗病毒RNA复制子系统的建立与应用
- 2013年
- 目的构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒(WNV)复制子。方法在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上,将其CMV启动子替换成SP6启动子,并在3'UTR端引入PacⅠ酶切位点,构建复制子克隆pSP6-WNrep。同时,将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和海肾荧光素酶(R.luc)报告基因分别插入上述复制子质粒中,获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc。将上述克隆线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,观察不同时间点绿色荧光蛋白(GFP)的活性和R.luc活性。结果与结论获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep/eGFP和pSP6-WNrep/R.luc,酶切和测序鉴定结果显示,序列与预期一致。将含有报告基因的复制子转染细胞72 h后仍能观察到荧光信号,R.luc的活性随时间延长而增强。本研究成功构建了WNV Chin-01株的RNA复制子,该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白,为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础。
- 张富军李晓峰曹飞赵慧邓永强朱舜亚姜涛秦鄂德秦成峰
- 关键词：RNA西尼罗病毒复制子转染
- 从噬菌体库中筛选抗SARS病毒S蛋白的Fab中和活性抗体研究被引量：3
- 2005年
- 目的从SARS病毒噬菌体抗体库中筛选出具有中和活性的抗S蛋白Fab片段抗体。方法ELISA方法对抗体库进行富集筛选及人源抗体克隆结合活性的测定,竞争ELISA初步筛选有中和活性的抗体,中和试验进一步确定中和活性,进而对其序列进行测定和分析。结果特异性富集了抗S蛋白噬菌体抗体,竞争ELISA筛选出两株抗体可部分阻断中和抗体2C5与S蛋白的结合,中和试验确定其具有一定中和活性,编号为M1A和P8A,测序结果表明它们为两株不同的抗体克隆。结论筛选获得了两株抗体可部分中和SARS病毒活性,它们的获得为探索SARS病毒感染的被动免疫治疗打下了一定基础。
- 康晓平杨保安赵慧祝庆余
- 关键词：人源抗体中和活性抗SARS病毒S蛋白FAB
- 痘苗病毒检测方法的建立
- 2005年
- 目的:建立痘苗病毒的检测方法。方法:采用细胞病变法观察痘苗病毒感染的HeLa细胞,通过电镜直接观察病毒颗粒的形态特征,观察鸡胚绒毛尿囊膜上形成的痘斑并用分子生物学方法分析痘苗病毒HA基因片段。结果与结论:痘苗病毒感染HeLa细胞34h后出现典型细胞病变。在病毒感染细胞47h后的培养上清和胞浆中均可通过电镜观察到病毒颗粒。感染的鸡胚绒毛尿囊膜上出现痘斑。进一步采用PCR法扩增病毒的HA基因,RFLP限制性内切酶片段多态性分析和序列测定证明该序列与已知序列一致。所建立的痘苗病毒系列检测方法,为天花相关病毒的实验室诊断奠定了基础。
- 段鸿元邓永强赵慧于曼李豫川严格秦鄂德
- 关键词：痘苗病毒天花病毒
- SARS病毒BJ01株核壳蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定被引量：3
- 2005年
- 通过RTPCR从SARS病毒BJ01株的RNA中扩增全长N基因,经凝胶回收后插入pBAD/TOPOThioFusion表达载体。然后在Top10中利用阿拉伯糖进行诱导表达,在优化的条件下,表达产物以可溶性为主,表达量约占细菌可溶性总蛋白的47%。表达产物采用ProBond蛋白纯化系统纯化后,目的蛋白约占67%。经免疫印迹法检测,表达产物与SARS病人恢复期血清和兔的抗血清均可进行特异反应。BJ01株核壳蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达为后续的ELISA试剂盒的研制奠定了基础。
- 陈水平刘素辉范宝昌赵慧姜涛秦成峰杨保安秦鄂德
- 关键词：SARS冠状病毒核壳蛋白可溶性表达纯化
- 登革2型病毒非结构蛋白NS4B及其突变体的真核表达与鉴定
- 2008年
- 目的:构建登革2型病毒非结构蛋白NS4B及其突变体Δ2K-NS4B基因的真核载体,并观察二者在哺乳动物细胞内的定位情况。方法:从登革2型病毒43株的全长cDNA克隆载体上扩增获得编码NS4B及缺失2K片段的NS4B突变体Δ2K-NS4B的基因;通过基因重组的方法分别将2段基因克隆入真核表达载体pcDNA6/V5-HisA,获得重组真核表达载体pc/D2-NS4B和pc/D2-Δ2K-NS4B;经脂质体法转染BHK-21细胞后,用RT-PCR、间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达的蛋白。结果:重组蛋白D2-NS4B和D2-Δ2K-NS4B可在BHK-21细胞中表达,二者均定位于细胞质中,并具有较好的抗原性,能够被抗登革2型病毒NS4B的多克隆抗体特异识别。结论:重组蛋白D2-NS4B和D2-Δ2K-NS4B在哺乳动物细胞胞质中的正确表达,为深入了解NS4B在登革病毒致病过程中的生物学功能奠定了基础。
- 赵慧刘忠钰秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒真核表达
- 登革病毒C基因突变对病毒RNA复制的影响
- 2009年
- 目的:分析C基因及其编码蛋白突变对登革病毒RNA复制的影响。方法:利用融合PCR方法在登革病毒复制子中引入C基因相应部位的缺失突变,将复制子RNA转染细胞后,利用报告基因活性分析、间接免疫荧光及实时定量PCR等方法分析其复制水平。结果:获得了含有不同α螺旋缺失突变的C基因的复制子质粒,并发现Δα1复制子复制水平明显下降。结论:登革病毒C蛋白α1螺旋或其编码序列对病毒RNA复制具有重要作用。
- 刘忠钰于学东赵慧刘然尉雁李晓峰邓永强姜涛于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒C基因复制子RNA复制
- 登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用
- 2008年
- 目的探讨登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用。方法首先通过mfold3·2软件对登革4型病毒5′端RNA二级结构进行预测,确定了3个突变位点:SLB1,缺失位于短茎环82-87位5′UAR环化序列,并破坏其保守茎环结构;SLB2,在次环引入突变破坏其环状结构(M77G/C);SLB3,突变仅涉及核苷酸,不破坏该次环二级结构(M77-78AG/GA)。然后在含有海肾荧光素酶(Renilla Luciferase,R·luc)报告基因的复制子(DEN-R·luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建上述突变体。将突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R·luc报告基因技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译水平进行检测。结果SLB1突变体的翻译水平并未受到显著影响,但其复制水平出现显著下调。SLB2突变体的翻译水平亦未受到显著影响,但其复制水平受到完全抑制;SLB3突变体的复制和翻译水平均受到了完全抑制。结论登革4型病毒5′非编码区SLB元件对基因组RNA复制和翻译具有重要的调控作用。
- 于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革热病毒复制子病毒复制翻译
- siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用研究
- 严重急性呼吸综合征(SevereAcuteRespiratorySyndrome，SARS)是人类在2l世纪初遭遇的烈性传染病之一，我国为该病的重要疫区。其病原体为SARS冠状病毒(SARSCoronavirus，SAR...
- 赵慧
- 关键词：SARS冠状病毒小干扰RNA绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展被引量：4
- 2012年
- 虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5能够通过多种机制调控宿主的抗病毒反应。NS5的多功能特点使其成为潜在的抗病毒药物靶点并受到广泛关注。本文综述了虫媒黄病毒NS5蛋白生物学功能的主要进展。
- 周希珍赵慧高岚秦成峰
- 关键词：NS5甲基转移酶
- siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用被引量：9
- 2005年
- 为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础.
- 赵慧陈水平段鸿元邓永强姜涛赵卓于曼康晓平杨保安李晓萸秦成峰秦鄂德
