杨军
- 作品数：16 被引量：33H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 人β-NGF真核表达载体的构建及其表达产物的生物活性被引量：7
- 2005年
- 目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/-βhNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆。经MTX加压筛选高表达-βhNGF的CHO细胞株。SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性。结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性。结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础。
- 陈勇蒋琳杨军李萍梁凌宇沈心亮谢云飞
- 关键词：真核表达载体基因表达生物活性二氢叶酸还原酶
- 抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用被引量：2
- 2001年
- Ig Y是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白 ,不但具有高免疫活性 ,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰 ,在免疫学试验中具有优越性 .用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白莱杭鸡获得特异性的Ig Y抗体 ,用辣根过氧化物酶标记后与抗人 Ig M单抗配伍建立捕获法酶免疫试验 ,与同类试剂对照 ,平行检测 192份临床血样 ,检测结果二者吻合 ,表明该 Ig Y具有良好的特异性和敏感性 .
- 沈荣沈心亮杨军谢云飞卜晓萍
- 关键词：IGY弓形虫酶联免疫吸附试验血清
- 重组人睫状神经营养因子的聚乙二醇化修饰被引量：2
- 2014年
- 目的:研究重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)突变体的聚乙二醇(PEG)化修饰,对rhCNTF的PEG化产物进行初步分离纯化及相关生物活性检测。方法:采用分子生物学技术经点突变得到rhCNTF的突变体CN10,通过实验设计研究CN10的最佳PEG化条件;采用分子筛层析方式对偶联产物进行初步纯化,最后用ELISA和小鼠体重增长抑制法检测PEG化后的CN10蛋白的生物活性。结果:能运用mPEG-MAL对CN10进行定点修饰,PEG化后用Superdex200能够分离CN10;PEG化后的CN10每2 d腹腔注射1次,对小鼠体重的增长抑制率可达50%,与rhCNTF每天注射2次的体重增长抑制作用相当。结论:CN10蛋白在PEG化修饰后,其减重效应持续时间明显延长。
- 梁凌宇雷清高雪峰杨军应莲芳蒋琳
- 关键词：人睫状神经营养因子纯化
- 重组人戊型肝炎疫苗细菌内毒素检查方法的建立被引量：3
- 2006年
- 确立重组人戊型肝炎疫苗原液的细菌内毒素检查方法。供试品参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)热原检查法进行热原检查,结果符合规定。该供试品同时参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)细菌内毒素检查法要求进行试验。供试品溶液在40μg/m l浓度下,确定内毒素限值为40EU/m l。供试品在该内毒素限值下干扰试验有效,且细菌内毒素检查法符合规定。该疫苗用内毒素检查法代替热原检查法,方法可行。
- 应莲芳杨军马超梁凌宇刘鹏
- 关键词：细菌内毒素检查方法
- 毕赤酵母表达戊型肝炎病毒ORF-2结构蛋白
- 目的：克隆HEV-ORF-2基因，构建酵母整合型表达质粒，在巴斯德毕赤酵母表达系统里表达，并对发酵工艺进行优化。
方法：从戊肝病毒基因库中，用PCR方法获取目的基因，克隆至表达载体pPIC9和pPICZαB，并...
- 谢溱杨军卜晓萍辛芳蒋琳
- 关键词：毕赤酵母戊型肝炎病毒发酵工艺工程菌
- 文献传递
- 中华仓鼠卵巢(CHO)工程细胞无血清培养的研究被引量：7
- 2004年
- 以DMEM∶F12(1∶1)为基础培养基,通过观察细胞生长状态和检测乙肝表面抗原的表达量作为评价指标,筛选适合于CHO工程细胞生长的生长因子,如胰岛素、转铁蛋白、氢化可的松、硒酸钠,丁二胺等。并且建立了J5SFM培养基。该培养基与商品化的无血清培养基比较,能够使细胞生长维持较长的时间,表达产物分泌量也相对较高。
- 李萍蒋琳黄思扬杨军李薇沈心亮
- 关键词：无血清培养基乙肝表面抗原
- RP-HPLC法检测CN_(10)蛋白的PEG化修饰率及含量被引量：3
- 2015年
- 目的建立一种简单有效的测定CN10蛋白PEG化修饰率的方法 ,用于PEG化修饰工艺中的质量控制。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以TSKgel Octadecyl-4PW作为色谱分离柱,以含0.12%三氟乙酸(TFA)、5%乙腈的水溶液作为A相溶液,以含0.1%TFA的乙腈作为B相溶液,在50℃柱温条件采用分段线性洗脱的方式分离蛋白,并考察CN10蛋白以及PEG化修饰后CN10蛋白的量效关系,根据外标法检测CN10和CN10-PEG的蛋白含量,根据PEG化修饰前后CN10蛋白量效关系的变化推断CN10蛋白的PEG化修饰率。结果 PEG化修饰前后的CN10蛋白经TSKgel Octadecyl-4PW色谱柱层析均能达基线分离,当用214 nm波长检测时,CN10蛋白浓度以及PEG修饰后的CN10蛋白均与其对应峰面积呈现良好的线性关系(r2=0.999 58;r2=0.999 67)。结论建立了一种简单快速的检测CN10蛋白PEG化修饰率的方法 ,此方法具有较高的准确性及专属性,可用于CN10的PEG化修饰工艺的监测。
- 梁凌宇王婉茹郭玉婷陆俭杨军蒋琳
- 关键词：睫状神经营养因子反相高效液相色谱
- 恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白ELISA定量检测方法的建立及其应用
- 2016年
- 目的建立恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白（25 KDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25）的ELISA定量检测方法。方法以双抗体夹心ELISA法为基础,建立Pfs25蛋白的ELISA定量检测方法,并对该方法进行重复性和准确性验证。用建立的方法检测不同重组菌株、CHO细胞中,以及经10 L发酵罐培养菌株纯化各阶段样品中Pfs25蛋白的表达量。结果建立的方法线性范围为0-1.6μg/ml,R2=0.984,检测灵敏度为0.032μg/ml,回收率为81%-119.0%,CV﹤15%。Pfs25-Pet42a/DE3表达后的Pfs25蛋白浓度在2.03-7.26μg/ml;Pfs25-p GAPZαA/GS115、Pfs25-p PICZαA/GS115和（α-Pfs25）8-p AO815/GS115表达后的Pfs25蛋白浓度分别为113、105和280μg/ml;3株Pfs25/CHO细胞表达的Pfs25蛋白浓度分别为106.11、116.89和155.01μg/ml。p PICZαAPfs25/GS115菌株发酵液中,Pfs25蛋白的增加呈先快后慢的趋势,72 h后,目的蛋白增加逐渐平缓;纯化洗脱液3个峰中Pfs25蛋白浓度分别为22.67、42.12和55.27μg/ml,流穿液中Pfs25蛋白浓度仅为0.096μg/ml。结论建立的Pfs25蛋白ELISA定量检测方法可用于疟疾疫苗研究中Pfs25蛋白的定量分析。
- 李刚马亚茹陈俏丽杨军陈勇蒋琳
- 关键词：蛋白含量酶联免疫吸附测定
- 重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化
- 目的：建立从高表达重组戊型肝炎病毒抗原的工程菌发酵和目的蛋白纯化的工艺。
方法：在三角烧瓶中，探讨了不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10升发酵罐中，探讨了诱导时间、补料方式、溶氧量对...
- 应莲芳梁凌宇杨军高雪峰蒋琳
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原工程菌蛋白纯化生物制品
- 文献传递
- 重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化
- 2007年
- 目的建立重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵和目的蛋白纯化工艺。方法在三角烧瓶中,探讨不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10L发酵罐中,探讨诱导时间、补料方式、溶氧量对菌体密度和目的蛋白表达量的影响。根据目的蛋白的理化特性建立纯化工艺。结果重组HEV抗原工程菌在10L发酵罐分批补料培养中,采用0·1mmol/L的IPTG诱导4h,目的蛋白表达量约为25%,目的蛋白产率约为2·88g/L,且以包涵体形式存在。经过对包涵体粗纯、复性、纯化,SDS-PAGE分析,纯度可达95%以上。结论建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵及纯化工艺,为重组HEV抗原的大规模生产奠定了基础。
- 应莲芳梁凌宇杨军高雪峰蒋琳
- 关键词：工程菌发酵纯化
