应莲芳
- 作品数：29 被引量：66H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程理学更多>>
- 细菌培养基中营养物质的代谢及优化方法被引量：5
- 2016年
- 细菌培养基是细菌体外生长的基质,其中营养物质是细菌生长、繁殖的基本成分。因此,探索培养基中营养物质的代谢,优化培养基配方,对细菌体外培养的研究及规模化生产有着重要的指导意义。现就细菌培养基分类、营养物质、细菌在营养物质中的代谢及培养基优化方法等方面予以总结。
- 杨明明李国晏应莲芳
- 关键词：细菌培养基营养物质代谢
- 采用一种新介质纯化神经生长因子
- 2000年
- 采用一种新离子交换介质Express IonC(简称IonC)使鼠神经生长因子 (mNGF)能得到规模纯化。以鼠颌下腺为原料 ,匀浆后 ,经Express IonC纯化得单一组分的mNGF ,用SDS PAGE测定其相对分子质量约为 13.7× 10 3,比活约 2 .3× 10 5U mg。结果表明IonC可替代CM 5 2 ,且更适于神经生长因子的规模化生产。
- 应莲芳周敏毅卜晓萍沈心亮
- 关键词：神经生长因子规模化生产
- 重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化
- 目的：建立从高表达重组戊型肝炎病毒抗原的工程菌发酵和目的蛋白纯化的工艺。
方法：在三角烧瓶中，探讨了不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10升发酵罐中，探讨了诱导时间、补料方式、溶氧量对...
- 应莲芳梁凌宇杨军高雪峰蒋琳
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原工程菌蛋白纯化生物制品
- 文献传递
- 人肿瘤坏死因子-α突变体在大肠杆菌中的表达及活性测定被引量：1
- 1999年
- 目的构建一种新型人肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）分子，测定其蛋白表达和生物学活性。方法在详细分析ＴＮＦα结构及其结构与功能关系的基础上，设计并人工合成了一对ＴＮＦα结构基因点突变引物。应用ＰＣＲ分子克隆技术构建了一种新型ＴＮＦα分子的编码基因，将该编码基因插入表达质粒，转化大肠杆菌，通过温度诱导获得了表达蛋白，对表达产物进行免疫学检测和生物活性检测。结果新构建的突变体ＴＮＦαΝ１与ＴＮＦαＥＬＩＳＡ试剂盒有免疫学反应，其含量为０．５μｇ／ｍｌ；在体外有生物学活性，为１０７ＢＵ／ｍｌ，比活为２．１×１０５ＢＵ／ｍｇ；理化性质与天然原型ＴＮＦα有所不同。结论得到了一种具有生物学活性的新型ＴＮＦα分子。
- 王潇吴敏沈心亮应莲芳翟雷郑荣梁
- 关键词：肿瘤坏死因子PCR大肠杆菌
- 重组人睫状神经营养因子突变体的构建、表达及生物活性分析被引量：6
- 2007年
- 目的:通过对原始CNTF的突变改造,降低表达蛋白的免疫原性,同时增加其稳定性,以期能用于临床治疗肥胖症。方法:以原始CNTF为模板,去掉N端的12个氨基酸、C端的14个氨基酸,并将C端末2个氨基酸点突变为极性较强的赖氨酸,在大肠杆菌中表达,获得CNTF-T突变体。结果:基因序列分析与原设计吻合,目的蛋白表达量占全菌体的35%左右,表达蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性、DEAE-FF纯化,纯度可达95%以上,小鼠体内生物活性测定,能明显抑制小鼠体重增长,且CNTF-T的生物活性比原始序列CNTF的活性高。结论:突变的CNTF-T有望成为新一代的生物减肥制剂应用于临床。
- 应莲芳雷清梁凌宇高雪峰蒋琳
- 关键词：突变体生物活性减肥
- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位表达条件的优化及其佐剂作用被引量：2
- 2008年
- 目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行免疫试验。结果可溶性重组大肠杆菌不耐热肠毒素(LTB)的表达量明显提高,纯化后蛋白含量达95%以上,经纯化的LTB作为三价流感裂解疫苗或gD抗原的佐剂免疫BALB/c小鼠,可提高小鼠血清及黏膜的抗体水平,且其效果与铝化剂及福氏佐剂相当或更高。结论优化了LTB的表达条件,且表达的LTB具有较强的黏膜免疫佐剂作用。
- 雷清黄思扬应莲芳梁凌宇马亚茹蒋琳
- 关键词：黏膜免疫纯化佐剂
- 包涵体蛋白复性技术研究进展被引量：24
- 2012年
- 本文对原核表达的包涵体蛋白的分离,洗涤,溶解及复性方法做了一个简单的总结。同时就国内外近几年的最新复性方法进行了概述。并分析了各种复性方法的利弊。
- 包义风应莲芳蒋琳
- 关键词：包涵体复性添加剂
- 重组人睫状神经营养因子的聚乙二醇化修饰被引量：2
- 2014年
- 目的:研究重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)突变体的聚乙二醇(PEG)化修饰,对rhCNTF的PEG化产物进行初步分离纯化及相关生物活性检测。方法:采用分子生物学技术经点突变得到rhCNTF的突变体CN10,通过实验设计研究CN10的最佳PEG化条件;采用分子筛层析方式对偶联产物进行初步纯化,最后用ELISA和小鼠体重增长抑制法检测PEG化后的CN10蛋白的生物活性。结果:能运用mPEG-MAL对CN10进行定点修饰,PEG化后用Superdex200能够分离CN10;PEG化后的CN10每2 d腹腔注射1次,对小鼠体重的增长抑制率可达50%,与rhCNTF每天注射2次的体重增长抑制作用相当。结论:CN10蛋白在PEG化修饰后,其减重效应持续时间明显延长。
- 梁凌宇雷清高雪峰杨军应莲芳蒋琳
- 关键词：人睫状神经营养因子纯化
- 重组人戊型肝炎疫苗细菌内毒素检查方法的建立被引量：3
- 2006年
- 确立重组人戊型肝炎疫苗原液的细菌内毒素检查方法。供试品参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)热原检查法进行热原检查,结果符合规定。该供试品同时参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)细菌内毒素检查法要求进行试验。供试品溶液在40μg/m l浓度下,确定内毒素限值为40EU/m l。供试品在该内毒素限值下干扰试验有效,且细菌内毒素检查法符合规定。该疫苗用内毒素检查法代替热原检查法,方法可行。
- 应莲芳杨军马超梁凌宇刘鹏
- 关键词：细菌内毒素检查方法
- 重组人睫状神经营养因子生物学活性检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半定量检测;应用TF-1.CN5a.1细胞增殖法检测rhCNTF的活性;应用正常小鼠减重法,对rhCNTF的减肥生物学活性进行检测。并探索4种方法的实验条件及优缺点。结果上述4种方法均能用于rhCNTF的生物学活性测定,以TF-1.CN5a.1细胞增殖法及正常小鼠减重法结合使用最为有效。结论可联合使用TF-1.CN5a.1细胞增殖法和正常小鼠减重法,对重组rhCNTF进行质量控制。
- 李萍蒋琳马亚茹应莲芳卜晓萍
- 关键词：睫状神经营养因子生物学活性
