刘忠钰
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
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- 登革病毒C基因RNA二级结构及编码蛋白在病毒复制中的作用
- 登革病毒(DEN)为黄病毒科(flaviviridae)黄病毒属(flavivirus)的重要成员,包括4个血清型(登革病毒1-4型,DEN 1-4)。登革病毒感染可导致登革热(dengue fever,DF)和症状更加...
- 刘忠钰
- 关键词：登革病毒RNA二级结构C蛋白复制子
- 文献传递
- 登革2型病毒非结构蛋白NS4B及其突变体的真核表达与鉴定
- 2008年
- 目的:构建登革2型病毒非结构蛋白NS4B及其突变体Δ2K-NS4B基因的真核载体,并观察二者在哺乳动物细胞内的定位情况。方法:从登革2型病毒43株的全长cDNA克隆载体上扩增获得编码NS4B及缺失2K片段的NS4B突变体Δ2K-NS4B的基因;通过基因重组的方法分别将2段基因克隆入真核表达载体pcDNA6/V5-HisA,获得重组真核表达载体pc/D2-NS4B和pc/D2-Δ2K-NS4B;经脂质体法转染BHK-21细胞后,用RT-PCR、间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达的蛋白。结果:重组蛋白D2-NS4B和D2-Δ2K-NS4B可在BHK-21细胞中表达,二者均定位于细胞质中,并具有较好的抗原性,能够被抗登革2型病毒NS4B的多克隆抗体特异识别。结论:重组蛋白D2-NS4B和D2-Δ2K-NS4B在哺乳动物细胞胞质中的正确表达,为深入了解NS4B在登革病毒致病过程中的生物学功能奠定了基础。
- 赵慧刘忠钰秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒真核表达
- 登革病毒C基因突变对病毒RNA复制的影响
- 2009年
- 目的:分析C基因及其编码蛋白突变对登革病毒RNA复制的影响。方法:利用融合PCR方法在登革病毒复制子中引入C基因相应部位的缺失突变,将复制子RNA转染细胞后,利用报告基因活性分析、间接免疫荧光及实时定量PCR等方法分析其复制水平。结果:获得了含有不同α螺旋缺失突变的C基因的复制子质粒,并发现Δα1复制子复制水平明显下降。结论:登革病毒C蛋白α1螺旋或其编码序列对病毒RNA复制具有重要作用。
- 刘忠钰于学东赵慧刘然尉雁李晓峰邓永强姜涛于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒C基因复制子RNA复制
- 基于登革2型病毒PrM基因的新型脱氧核酶对病毒RNA降解作用的初步观察
- 登革病毒(dengue virus,DEN)可引起人类登革热、登革出血热和登革休克综合征,致病机制尚不清楚,目前缺乏有效的防治措施。随着分子生物学的发展及对病毒基因组结构与功能的阐明,以核酸为基础的小分子药物成为抗病毒研...
- 尉雁姜涛李晓峰赵慧刘忠钰邓永强刘然陈水平于曼秦鄂德
- 文献传递
- 登革2型病毒中国株3′非编码区RNA元件对翻译的影响被引量：2
- 2008年
- 【目的】探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响。【方法】首先构建登革2型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因(virus induced reporter gene,VIRG),在此基础上分别构建包含DEN2-433′UTR不同RNA元件的VIRG,并通过LUC检测、实时RT-PCR和Western blot方法分析含有不同元件VIRG对翻译效率的影响。【结果】发现完整的3′UTR缺失可显著抑制翻译,含有病毒VR元件VIRG的翻译水平与完整3′UTR的VIRG相似,RCS2或CS2元件可提高VIRG的翻译效率,CS1或SL元件可降低VIRG的翻译效率。【结论】DEN2-43病毒基因组3′UTR参与了报告基因的翻译,其不同元件具有可上调和下调报告基因翻译效率的作用。
- 尉雁姜涛李晓峰赵慧刘忠钰邓永强刘然秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革病毒翻译调控
- 血清HCV-Ab与HCV-RNA联合检测在丙型肝炎早期诊断中的应用评估
- 2010年
- 张乐研徐攀刘忠钰毛庆民
- 黄病毒多功能酶NS3研究进展被引量：1
- 2006年
- 黄病毒非结构蛋白NS3是一个具有多种酶活性的蛋白,其N端为丝氨酸蛋白酶结构域,C端为RNA解旋酶/核苷三磷酸酶/RNA 5′三磷酸酶结构域。NS3在病毒前体蛋白的加工和病毒基因组的复制过程中发挥重要功能。对NS3的研究有助于新型疫苗和抗病毒药物的设计。本文试图对近年来NS3研究的进展情况进行一简要的回顾。
- 刘忠钰秦鄂德
- 关键词：黄病毒NS3蛋白酶解旋酶
- 登革2型病毒非结构蛋白NS4B的原核表达、纯化及多克隆抗体制备被引量：2
- 2009年
- 目的:原核表达、纯化登革2型病毒非结构蛋白NS4B,并制备其多克隆抗体,以研究其结构与功能。方法:扩增编码登革2型病毒NS4B的24～238位氨基酸残基的基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中回收融合蛋白;用纯化后的融合蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,采用间接免疫荧光法检测抗体效价。结果:原核表达了NS4B-GST融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,抗体效价为1∶800。结论:登革2型病毒NS4B的24～238位氨基酸残基可诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,这为研究NS4B的结构与功能奠定了基础。
- 赵慧邓永强刘忠钰李晓峰陈水平姜涛秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革2型病毒原核表达多克隆抗体
- 基于登革2型病毒PrM基因的新型脱氧核酶对病毒RNA降解作用的初步观察
- 2007年
- 目的:针对登革2型病毒(DEN2)PrM基因设计新型脱氧核酶并观察其抗病毒作用。方法:根据脱氧核酶(DR z)裂解RNA靶位的特异性,选择DEN2 PrM基因中符合5′…R↓Y…3(′R=A/G,Y=U/C)特征且其二级结构中以未配对与配对碱基的磷酸二酯键为靶位,设计合成DEN2特异性脱氧核酶,筛选具有裂解PrM RNA活性的DR z。观察DR z与靶序列浓度比、Mg2+浓度及反应时间对DR z裂解效率的影响。结果与结论:体外裂解实验显示,在所设计合成的8个脱氧核酶中,DR z614对登革病毒的PrM RNA靶序列具有裂解活性,降解效率高达82%。本研究为进一步探讨新型抗登革病毒策略奠定了基础。
- 尉雁姜涛李晓峰赵慧刘忠钰邓永强刘然陈水平于曼秦鄂德
- 关键词：登革病毒脱氧核酶
- 狂犬病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的构建狂犬病毒载体,为新型疫苗研究提供依据。方法将狂犬病毒减毒株SAE基因组分段扩增,然后经逐步拼接得到全基因组克隆,并在其中引入转录终止-起始元件和多克隆位点获得重组质粒pSAETOPO。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和西尼罗病毒prME基因分别克隆至pSAETOPO,然后将带有这两个基因的狂犬病毒全长cDNA切下并克隆至pcDNA3.1(+)载体。将获得的重组质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME转染细胞,分别观察辅助病毒对外源基因表达的影响。结果获得狂犬病毒载体质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME,经酶切分析和序列测定表明所构建克隆是正确的。pcSAE-GFP及pcSAE-ME转染细胞后,在辅助病毒存在下可表达相应外源基因。结论构建的狂犬病毒载体质粒可表达外源基因,为进一步获得表达外源基因的重组狂犬病毒奠定了基础。
- 刘忠钰袁慧君朱武洋姜涛陈水平于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：狂犬病毒病毒载体绿色荧光蛋白
