韩剑峰
- 作品数：31 被引量：87H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 利用感染性克隆与体外突变技术研究刺突蛋白在SARS病毒致病机制中的作用
- SARS病毒是已知RNA病毒中基因组最大的一类病毒,目前对其结构功能与致病机理等了解尚少,反向遗传学及体外突变技术为深入开展该领域研究提供了技术手段。刺突蛋白参与SARS病毒与细胞受体结合及膜融合入侵过程,决定着病毒的感...
- 韩剑峰陈水平姜涛秦成峰邓永强于曼秦鄂德
- 关键词：SARS病毒致病机制感染性克隆
- 文献传递
- 一种蛋白及其编码基因以及疫苗和它们在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的应用
- 本发明公开了一种蛋白及其编码基因以及疫苗和它们在制备用于预防寨卡病毒感染的疫苗中的应用。具体地，本发明公开了一种蛋白，其中，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了编码上述蛋白的基因，和含有所述基因...
- 秦成峰韩剑峰李晓峰赵慧邓永强姜涛
- 文献传递
- 我国SARS病毒BJ01株基因组亚cDNA克隆的构建与鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建我国SARS病毒BJ0 1株基因组全序列的亚cDNA克隆 ,为进一步构建该毒株的全长感染性cDNA克隆奠定基础。方法 :根据BJ0 1株病毒基因组序列中含有的特异酶切位点 ,利用DNAstar软件设计 7对引物 ,然后通过RT PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的 7个cDNA片段 ,并分别将其克隆至pGEM TEasy或Topo载体。结果与结论 :已构建出SARS CoVBJ0 1株基因组的 7个亚cDNA克隆 ,经酶切鉴定和序列测定表明 ,所获得的cDNA克隆为BJ0 1株病毒的特异序列。
- 赵卓韩剑峰范宝昌陈水平姜涛于曼何维明祝庆余秦鄂德
- 关键词：RT-PCRCDNA克隆
- SARS-CoV BJ01株S蛋白基因突变对病毒感染性的影响
- 2008年
- 目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观察突变病毒与原型病毒对细胞感染性的差异。结果:获得了S蛋白不同位点的突变病毒,受体结合位点的突变明显降低了BJ01株病毒对Vero E6细胞的感染性,突变病毒的蚀斑滴度比原型病毒降低3个数量级。结论:SARS-CoV BJ01株S蛋白的受体结合位点及七肽重复区与病毒的毒力及致病性密切相关。
- 韩剑峰姜涛陈水平李晓峰秦成峰于曼秦鄂德
- 关键词：SARS冠状病毒刺突蛋白
- SARS-CoV细胞受体的研究进展被引量：4
- 2007年
- 严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrom e,SARS)是由SARS冠状病毒(SARS coronavirus,SARS-CoV)感染引起的一种新发严重急性呼吸系统传染病。SARS-CoV受体的阐明对于了解病毒的宿主与组织嗜性具有重要意义,同时也有助于了解病毒的致病机制以及研发阻止病毒结合受体的抗病毒药物。目前的研究发现SARS-CoV的受体包括血管紧张素转换酶2(ACE2)和CD209L,二者在SARS-CoV的感染致病过程中均发挥重要作用。本文综述了在SARS-CoV细胞受体结构与功能方面的研究进展。
- 韩剑峰秦鄂德
- 关键词：SARS-COV病毒受体ACE2
- 登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用
- 2008年
- 目的探讨登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用。方法首先通过mfold3·2软件对登革4型病毒5′端RNA二级结构进行预测,确定了3个突变位点:SLB1,缺失位于短茎环82-87位5′UAR环化序列,并破坏其保守茎环结构;SLB2,在次环引入突变破坏其环状结构(M77G/C);SLB3,突变仅涉及核苷酸,不破坏该次环二级结构(M77-78AG/GA)。然后在含有海肾荧光素酶(Renilla Luciferase,R·luc)报告基因的复制子(DEN-R·luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建上述突变体。将突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R·luc报告基因技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译水平进行检测。结果SLB1突变体的翻译水平并未受到显著影响,但其复制水平出现显著下调。SLB2突变体的翻译水平亦未受到显著影响,但其复制水平受到完全抑制;SLB3突变体的复制和翻译水平均受到了完全抑制。结论登革4型病毒5′非编码区SLB元件对基因组RNA复制和翻译具有重要的调控作用。
- 于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德
- 关键词：登革热病毒复制子病毒复制翻译
- 西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能研究
- 2008年
- 目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以上此为模板,经体外RdRp活性分析及凝胶阻滞试验,观察NS5的RdRp活性及与突变体的结合能力,再将突变位点引入该病毒感染性全长cDNA克隆,初步观察突变体恢复病毒的生物学特性。结果5′UTR中第45-60位核苷酸缺失的突变体无法合成子链,与NS5的结合能力也显著降低。第8和9位核苷酸改变的突变体则丧失了合成子代RNA及与NS5的结合能力,第8、9、69和70位核苷酸突变后形成的结构恢复突变体则可以合成子链RNA,并可与NS5特异性结合。同时,第45-60位核苷酸缺失及第8和9位核苷酸突变的恢复病毒的增殖能力也显著降低。结论Chin-01株5′UTR中的第45-60位及第8、9、69和70位核苷酸维持的结构可能是该病毒基因组复制的关键位点。
- 李晓峰姜涛陈水平韩剑峰邓永强秦成峰于曼秦鄂德
- 关键词：西尼罗病毒病毒非结构蛋白质类
- 西尼罗病毒Chin-01株基因组非编码区的序列测定及分析被引量：3
- 2008年
- 目的对西尼罗病毒(WNV)Chin-01株基因组非编码区(UTR)序列进行测定,了解其与已报道毒株的序列差异及系统发育关系。方法采用5′和3′RACE法对Chin-01株病毒基因组的UTR进行RT-PCR扩增,测定扩增产物序列,采用DNAstar软件对该株及其他9株WNV的UTR进行序列同源性分析,同时构建了基于3′UTR的系统发育树,并用RNA structure软件预测其二级结构。结果Chin-01株基因组5′和3′UTR分别为96nt和630nt,序列同源性分析的结果表明,其5′UTR与其他9株的同源性均达到99%或100%,而3′区UTR与埃及Eg101株的同源性最高,达98·1%。5′UTR的起始核苷酸为AG,并含有一段与3′UTR互补的14nt序列。3′UTR的末端为CUOH,包含一段完全保守的5nt序列,以及三个保守的称为CS2、RCS2和CS1的基序。二级结构预测发现,Chin-01株5′UTR呈长茎环结构,3′UTR的3′端也可形成多个保守的茎环结构。结论Chin-01株与埃及Eg101株亲缘关系最为密切。
- 李晓峰姜涛陈水平韩剑峰邓永强秦成峰于曼秦鄂德
- 关键词：西尼罗病毒非翻译区
- 检测肠道病毒71型的专用引物及其应用
- 本发明公开了一种检测肠道病毒71型的专用引物及其应用。本发明提供的专用引物，包括序列表的序列1至序列4所示的DNA，优选由序列表的序列1至序列6所示DNA组成。本发明的专用引物适用于对肠道病毒71型(EV71)进行特异性...
- 秦成峰姜涛刘娟韩剑峰秦鄂德
- 重症手足口病免疫球蛋白治疗的机理探讨被引量：42
- 2011年
- 手足口病是由多种肠道病毒感染导致的一种急性儿科传染病。近年来,我国肠道病毒71型(EV71)手足口病发病率急剧上升,重症病例时有报道,严重威胁儿童健康。临床上对于重症手足口病的治疗缺乏有效手段,主要以对症治疗和支持疗法为主。静脉注射人免疫球蛋白由健康献血员血浆提取纯化而来,含有包括EV71在内的多种肠道病毒的中和抗体,可作为重症手足口病被动免疫和免疫调节的重要手段,值得关注。
- 曹瑞源韩剑峰秦鄂德秦成峰
- 关键词：肠道病毒71型手足口病免疫球蛋白中和抗体
