王小兵
- 作品数：4 被引量：35H指数：4
- 供职机构：石河子大学农学院园艺系更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 库尔勒香梨的苹果茎痘病毒cDNA探针检测技术研究被引量：7
- 2004年
- 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表明 ,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号 。
- 牛建新朱军马兵钢覃伟铭王小兵吴忠华
- 关键词：库尔勒香梨苹果茎痘病毒CDNA探针
- 利用RT-PCR检测库尔勒香梨苹果茎痘病毒的研究被引量：7
- 2003年
- 以库尔勒香梨新鲜、冷藏、冷冻叶片和皮层为材料 ,对提取双链RNA (dsRNA)的 2种方法和提取总RNA的 3种方法进行了分析比较 ,并对总RNA的提取方法进行了改进 ,获得了纯度较高、完整性较好的dsRNA和总RNA ,在此基础上进行了反转录 (RT)和PCR扩增。在国内首次完成了对苹果茎痘病毒 (ASPV)的RT PCR检测 ,建立了ASPV有效RT PCR反应体系。用此体系扩增到ASPV一个长约 316bp的片段。实验表明以dsRNA和总RNA为模板均能成功进行RT PCR检测 ,且dsRNA优于总RNA。
- 刘连科牛建新王小兵覃伟铭
- 关键词：库尔勒香梨苹果反转录PCR扩增
- 库尔勒香梨上ACLSV的RT—PCR检测被引量：18
- 2003年
- 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料通过改进提取方法提取总RNA,获得了较完整的RNA,在此基础上进行了反转录和PCR扩增。并进行了库尔勒香梨上ACLSV(Apple chlorotic leaf sopt virus)的RT-PCR检测,建立了该病毒的RT-PCR检测体系。用此体系扩增得到了ACLSV一个长约为358bp的片段。
- 牛建新刘连科朱军覃伟铭吴忠华王小兵
- 关键词：库尔勒香梨RT-PCR
- 库尔勒香梨脉黄病毒RT-PCR检测技术研究被引量：13
- 2003年
- 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对总RNA提取方法进行了研究 ,从中筛选出了适合库尔勒香梨总RNA的提取方法。结果表明 ,要获得良好的RT PCR扩增 ,RT体系中dNTPs浓度、互补引物、AMV、模板的浓度要分别达到 0 .1mmol·L-1、0 .2 μmol·L-1、0 .0 5U·μl-1、0 .0 1μg·μl-1以上。此外 ,使用RNasin能有效抑制RT体系中RNase对病毒RNA的降解作用 ,可使RT过程顺利进行 ;PCR体系中dNTPs浓度至少要达到 0 .1mmol·L-1,0 .2～ 0 .3mmol·L-1可以获得最佳的扩增效果 ;TaqE浓度要达到 0 .0 15U·μl-1以上 ;引物浓度适宜范围 0 .3～ 0 .7μmol·L-1;Mg2 + 要达到 1.2 6mmol·L-1以上。
- 牛建新刘连科王小兵覃伟铭
- 关键词：库尔勒香梨RT-PCR检测技术RNA提取方法
