葛以跃
- 作品数：87 被引量：183H指数：7
- 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 弓形虫培养上清体外对CD4^+CD25^+T细胞的影响被引量：9
- 2007年
- 目的探讨体外培养条件下弓形虫培养上清对CD4+CD25+T细胞的影响。方法用弓形虫培养上清和自小鼠脾脏分离的CD4+CD25+T细胞共同孵育,Annexin-v染色法检测CD4+CD25+T细胞的凋亡情况,淋巴细胞增殖实验检测CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制功能。结果用弓形虫培养上清孵育10h的小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞有(36.90±0.36)%出现凋亡,和RPMI-1640孵育组相比,凋亡率上升了(13.60±2.15)%。与RPMI-1640孵育组相比,用弓形虫培养上清处理5、10h的小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制功能下降(P<0.01)。结论弓形虫培养上清中可能存在某些成分能够诱导CD4+CD25+T细胞出现凋亡,并使CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制功能下降。
- 张改葛以跃吴江平王勇胡伟谭明娟
- 关键词：弓形虫CD4^+CD25^+T细胞凋亡
- 新型冠状病毒N亚基因组荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- 2023年
- 目的建立一种快速检测新型冠状病毒N亚基因组(SgN)的方法,探讨其在新型冠状病毒肺炎病例及环境样本中的应用价值。方法根据全球共享流感数据库(GISAID)公布的新型冠状病毒全基因组序列设计SgN特异性引物和探针,优化退火温度、引物与探针浓度等反应条件,建立新型冠状病毒SgN荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,评价该方法的灵敏性、重复性和特异性。采用建立的病毒SgN荧光定量PCR检测方法检测21份环境和351份临床样本,并选取25份SgN阳性样本进行病毒分离以评估该检测方法的应用效果。结果 SgN的引物和探针对新型冠状病毒具有良好特异性。初步建立的病毒SgN荧光定量PCR检测方法最低检测限为1.5×102copies/ml,变异系数小于1%。372份样本的gRNA阳性率为97.04%(361/372),gRNA阳性样本中阳性环境样本和阳性临床样本的SgN阳性率分别为36.84%(7/19)和49.42%(169/342)。其中野生型毒株样本的SgN阳性率及拷贝数均比德尔塔(Delta)毒株低。在25份SgN阳性样本中,采样时间在5 d内的12份样本均分离到病毒;13份采样时间在12 d以上的样本未发生细胞病变。结论成功建立了一种检测新型冠状病毒SgN的荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度、特异性和重复性均较好。
- 朱小娟陈银吴斌葛以跃吴涛乔乔赵康辰崔仑标
- 关键词：新型冠状病毒荧光定量PCR
- 刚地弓形虫感染对孕鼠脾脏及母胎界面CD4～+CD25～+调节性T细胞的影响
- 刚地弓形虫/(Toxoplasma gondii/)是人畜共患细胞内寄生原虫，所致的弓形虫病呈世界性分布。对免疫功能正常机体，弓形虫感染一般仅造成隐性感染状态，但妇女在怀孕期间感染弓形虫却可以导致流产、死胎、死产以及胎儿...
- 葛以跃
- 关键词：刚地弓形虫CD4~+CD25~+调节性T细胞FOXP3
- 文献传递
- 2020年江苏省306例不同特征新冠肺炎病例咽拭子病毒载量分布被引量：2
- 2022年
- 目的分析不同临床严重程度的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)病例咽拭子中的病毒载量,及与患者年龄、性别和发病间隔的关系,为深入了解SARS-CoV-2的传染性和致病性提供依据。方法采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR),对2020年江苏省306例入院前未经抗病毒治疗的新冠肺炎(COVID-19)病例咽拭子中SARS-CoV-2病毒载量进行检测,并对不同病情患者的病毒载量进行分析。结果306例新冠肺炎病例中,男性占56.9%,30~59岁占68.0%;普通肺炎型占66.7%,轻症无肺炎型占24.8%,重症肺炎型占8.5%;病例发病和首次SARS-CoV-2核酸阳性的发病间隔为-4~15 d,主要集中在0~8 d(256例,占83.7%)。不同年龄组病情分布差异有统计学意义(P<0.01):轻症以2~29岁组占比高(36.2%),普通肺炎型以30~59岁组占比高(70.2%),重症肺炎型以60~97岁组占比高(21.6%);不同年龄组重症占比、不同发病间隔组病情分布差异均有统计学意义(P值均<0.01)。普通肺炎组、重症肺炎组和轻症非肺炎组病例平均病毒载量对数值分别为(5.93±1.23)、(6.17±1.54)、(6.28±1.28)/ml(log10),差异无统计学意义(t=1.02,P=0.31);部分患者尤其是轻症患者发病时已检出新冠病毒核酸阳性且病毒载量较高(6.43±1.34)/ml(log10);重症肺炎患者的平均病毒载量在发病间隔4~5 d组最高,非重症肺炎患者在发病间隔2~3 d组最高。结论不同特征新冠肺炎病例病毒载量分布存在一定差异;病毒RNA载量与病情有一定关系。
- 江梦圆陈银吴斌刘康崔仑标朱小娟吴涛赵康辰葛以跃朱凤才
- 关键词：病毒载量荧光定量PCR
- 一种恒温快速检测甲型H1N1流感病毒核酸的方法及试剂盒
- 本发明涉及一种检测病毒核酸的方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明是一种快速、等温的甲型H1N1流感病毒RNA扩增方法，整个反应有赖于AMV逆转录酶、T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNase H)共同协作而完成，不需特殊仪...
- 崔仑标葛以跃史智扬祁贤郭喜玲赵康辰单军单云峰戚宇华汪华
- 甲型H1N1(2009)流感流行后流感样病例呼吸道病原检测分析被引量：3
- 2011年
- 目的:了解甲型H1N1(2009)流感流行后的流感样病例(ILI)中,除流感病毒外的相关病原分布,为ILI患者临床治疗、流行病学调查提供参考。方法:收集流感监测哨点医院393份ILI咽拭子标本提取核酸,应用实时荧光PCR方法进行20种相关病原比对检测,分析各病原的阳性率与构成比。结果:检测出阳性咽拭子标本51例,分属13种共计64株病原体,其中阳性率较高的为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、冠状病毒。另有13例为两种病原体混合感染,占阳性标本数的25.49%。结论:ILI的病原构成比较复杂,且存在混合感染,临床治疗与流行病学调查均应引起重视。
- 单云峰葛以跃崔仑标赵康辰单军戚宇华崔岚秦圆方祁贤霍翔
- 关键词：流感样病例病原体实时荧光PCR
- 腺病毒55型感染肺炎患者的病原学鉴定及全基因序列分析被引量：5
- 2017年
- 目的对1例不明原因肺炎患者进行病原学诊断,分析其病原学特征及重组特点,为其防治提供参考。方法采集患者的咽拭子标本,提取DNA,采用Real-time荧光定量PCR法检测病原体特异性片段;采用Hep-2细胞培养分离病毒;通过Sanger测序hexon基因进行型别鉴定,通过高通量测序技术对病毒进行全基因组测序,采用MEGA6.0软件进行序列比对,通过邻近归并法(Neighbor-Joining)构建种系发生进化树分析基因特征,运用Simplot软件进行序列重组分析。结果从患者咽拭子标本中检测并分离到腺病毒,hexon基因测序后进行比对分析,其与腺病毒B组55型及11型同源性较高;全基因测序显示该病毒与HAdV-55QS-DLL及Shanxi/QZ01/2011株同源性较高,在E1B、DNA-Polymerase、100Ka Hexon和Fiber编码区存在氨基酸变异;种系发生进化树显示该毒株与腺病毒14型同属一支,与腺病毒11型进化分支较近;相似性曲线及BootScan分析显示该病毒株于hexon编码区存在HAdV-11与HAdV-14型间重组。结论本例患者不明原因肺炎由腺病毒B组55型感染引起,该病毒由HAdV-11与HAdV-14重组产生,其生物学特性有待进一步研究。
- 朱小娟郭喜玲赵康辰葛以跃吴涛戚宇华陈银史智扬朱凤才周明浩崔仑标
- 关键词：不明原因肺炎分子特征
- 重组酶介导的等温扩增技术结合CRISPR-Cas13a蛋白检测8种境外输入性病毒被引量：1
- 2022年
- 目的基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)和CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测,建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus,YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)为检测对象,设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA),建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应,评价方法的灵敏度和特异性,使用登革热疑似临床样本进行检测,并与荧光RT-PCR技术进行比较,同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39℃条件下,40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体,灵敏度达到1~10拷贝/μl,并且这8种病原体之间无交叉反应,临床样本均可100%检测出。结论建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。
- 郭悦安柏霖刘丹丹罗君红赵康辰朱小娟葛以跃吴宏斌崔仑标
- 关键词：输入性传染病病毒
- 基于逆转录-环介导等温扩增技术快速检测发热伴血小板减少综合征病毒方法的建立被引量：5
- 2014年
- 目的建立1种快速、特异、灵敏的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)的检测方法。方法针对SFTSV M基因保守区域的核酸序列,设计逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)特异性引物,优化反应体系和条件。用毛细管电泳法和横向流动试纸条(LFD)法检测扩增产物,建立RT-LAMP检测方法。进行敏感性、特异性检验,并与Real-time RT-PCR法进行比较。结果以LFD法和毛细管电泳法检测RT-LAMP扩增产物具有相同的敏感性和特异性;RT-LAMP-LFD检测SFTSV的敏感性为10copies RNA分子/反应,且与其他病毒无交叉反应。RT-LAMP-LFD和Real-time RT-PCR检测临床标本阳性率差异无统计学意义(P>0.05),2种方法一致性好(Kappa=0.918)。结论建立的RT-LAMP方法快速、简单、操作简单,具有较高的敏感性和特异性,适合应用于基层单位和现场SFTSV的快速检测。
- 葛以跃赵康辰崔仑标戚宇华郭喜玲陈银焦永军史智扬周明浩
- 关键词：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
- 一种呼吸道病原体检测试剂盒
- 本发明公开了一种呼吸道病原体检测试剂盒，该试剂盒是基于多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色原理使用的，包含了6种引物探针组合中的1种或几种，可用于同时检测甲型流感/禽流感病毒（FluA）、乙型流感病毒(FluB)、SA...
- 樊欢戚宇华朱政崔仑标葛以跃史智扬吴涛
- 文献传递
