韩伟国
- 作品数：8 被引量：67H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因芯片技术检测10种烈性RNA病毒被引量：8
- 2006年
- 目的利用基因芯片技术检测包括披膜病毒科甲病毒属、黄病毒科黄病毒属、布尼亚病毒科汉坦病毒属及SARS病毒等10种烈性RNA病毒。方法设计了甲病毒属的属保守区通用引物和黄病毒属的通用引物,与布尼亚病毒及SARS病毒的引物一起用于扩增靶核酸。另外,在通用引物所能扩增的区域内设计每种病毒的特异引物,利用该引物通过PCR反应制备cDNA克隆探针,在判定其特异性后,制备氨基化探针。对探针浓度、杂交温度、杂交时间、不同杂交液及杂交后芯片的洗涤方法进行了优化。结果核酸探针浓度为0·3μg/μl时,可获得杂交信号;在杂交液终浓度含20%甲酰胺、杂交60℃、1·5h的条件下,可分别获得以上10种病毒的特异杂交信号。利用多重PCR扩增靶序列时,可获得2种或4种混合病原体的特异性杂交信号。结论利用基因芯片技术检测病毒性病原体是可行的,关键在于设计合适的引物及探针序列。
- 杨银辉杨瑞馥常国辉司炳银翟俊辉吕富双周东生韩伟国祝庆余
- 关键词：寡核苷酸序列分析
- SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察被引量：5
- 2004年
- 观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果 ,为进一步的临床研究奠定基础 .将BJ0 1株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清 ,经 β 丙内酯灭活和超滤浓缩 ,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗 .经HPLC分析其纯度为 97.6 % ,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒 .蛋白质印迹 (westernblotting)分析表明 ,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应 .纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准 .用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体 ,可阻止SARS病毒在猴体内增殖 ,且对SARS病毒攻击具有保护作用 .在低中和抗体情况下 ,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象 .猴体免疫SARS灭活疫苗后 ,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫 ,均未发现局部和全身副反应 。
- 秦鄂德石慧颖唐琳王翠娥常国辉丁志芬赵铠汪建于曼司炳银刘建源陈则吴东来彭文明孟庆文刘伯华韩伟国尹训南段鸿元杨保安战大伟田龙程晓洁吴劲松谭刚李懿李豫川李双利刘永刚刘洪
- 关键词：猴体SARS病毒灭活疫苗免疫原性中和抗体疫苗免疫
- 新分离的冠状病毒与严重急性呼吸综合征病原关系的研究被引量：16
- 2003年
- 目的 确定新分离的冠状病毒与目前流行的严重急性呼吸综合征的病原关系。方法 以用细胞培养法从严重急性呼吸综合征病例标本中分离出的冠状病毒为抗原 ,通过免疫荧光染色及中和试验测定严重急性呼吸综合征患者血清中抗新分离的冠状病毒的抗体 ,分析确定新冠状病毒与严重急性呼吸综合征的病原关系。结果 在临床确诊的 1 1 3份严重急性呼吸综合征患者血清标本中 ,99份检测出有抗新冠状病毒的抗体。 1 0对双份血清检测结果显示 ,后采集的血清抗体效价均比发病初期采集的明显增高 ,最高的升高 1 2 8倍。中和试验结果证明 ,病人血清抗体能够中和新分离的冠状病毒。结论 新分离的冠状病毒与此次流行的严重急性呼吸综合征密切相关 。
- 祝庆余秦鄂德于曼司炳银杨保安刘洪吕富双常国辉彭文明范宝昌邓永强韩伟国石玉玲李林海张泮河赵秋敏曹务春
- 关键词：严重急性呼吸综合征SARS新冠状病毒
- 人类致病病毒属水平基因筛查芯片的制备及其在黄病毒属检测中的初步应用被引量：7
- 2006年
- 目的：制备人类致病病毒属水平高通量筛查用基因芯片，并通过检测黄病毒属病毒初步验证其筛查效果。方法：利用Clustal W和BLAST软件设计针对人类致病病毒的属特异性寡核苷酸探针，对探针浓度、杂交温度、杂交时间、不同杂交液及杂交后芯片的洗涤方法进行优化。分别用特异或随机PCR方法从病毒感染的细胞培养上清中扩增病毒核酸，在扩增过程中掺入aa-dUTP并进一步偶联cy5或cy3荧光素进行标记，随后与基因芯片进行杂交，并通过荧光扫描仪对杂交结果进行分析，然后分析检测的特异性和敏感性验证基因芯片的筛查效果。结果：共设计了针对人类医学病毒的1090条寡核苷酸探针及其他阳性、阴性对照探针，其中黄病毒属共46条探针，Tm值为77，67～83．53℃，通过随机或特异PCR扩增8株黄病毒属病毒核酸，在42℃、过夜杂交的条件下，通过基因芯片方法均获得了黄病毒属特异性杂交信号，与其他属病毒之间没有非特异性交叉反应。结论：所制备的基因芯片可用于黄病毒属病毒的快速筛查，本研究为进一步建立大规模病毒性病原体的高通量筛查与鉴定技术平台提供了实验依据。
- 杨银辉韩伟国胡玉洋康晓平曾海攀陈晨刘洪朱晓光刘国振祝庆余
- 关键词：基因芯片黄病毒寡核苷酸探针
- SARS病毒抗体间接免疫荧光检测方法的建立被引量：14
- 2003年
- 目的 建立快速检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中特异抗体的间接免疫荧光方法 ,为SARS的临床确诊提供参考依据。方法 用本实验室新分离的SARS冠状病毒BJ0 1和GZ0 1株感染Vero E6细胞 ,待 2 5 %细胞出现病变时 ,用胰蛋白酶消化细胞后以 2× 10 7/ml浓度 4 0 μl的细胞滴到 10孔镀膜的玻片上 ,CO2 温箱培养 4h后丙酮固定。利用制备的抗原片通过间接免疫荧光检测了从北京和广州地区采集的 15 4例临床诊断为SARS的患者和 14例非SARS呼吸系统疾病和 10 0份健康人血清。结果 成功地建立了检测SARS冠状病毒抗体的间接免疫荧光染色方法 ,并对 15 4例临床诊断为SARS的患者的血清标本进行检测 ;SARS冠状病毒抗体阳性 14 2例 ,阳性率为 92 3% ,而 14例非SARS呼吸系统疾病患者和 10 0名健康人血清检测均为阴性。结论 本方法具有良好的特异性和灵敏度 。
- 司炳银杨保安于曼刘洪吕富双韩伟国张雨石玉玲李林海秦鄂德祝庆余
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒间接免疫荧光
- 间接免疫荧光抗体试验在传染性非典型肺炎诊断中的应用被引量：18
- 2003年
- 目的 评价应用间接免疫荧光抗体试验 (IFA)在传染性非典型肺炎 [严重急性呼吸综合征 (SARS) ]诊断中的可靠性 ,探讨SARS患者发病后血清抗体在体内的产生规律。方法 采用IFA方法检测不同发病时间的临床确诊SARS病例、疑似病例和其他人群的血清SARS病毒抗体 ,同时对每一个研究对象采用调查表进行一般情况调查。结果 在发病 10天内 ,SARS患者血清IgG阳性率为 5 5 .1%,IgM阳性率为16 .3 %;发病 10天后SARS患者IgG阳性率达89.8%,IgM阳性率达6 5 .3%;发病 2 5天以后SARS患者IgG、IgM阳性率均为90 .9%。对发病时间与抗体阳性率采用趋势χ2 检验 ,结果显示SARS患者血清IgG、IgM抗体阳性率随着发病时间而上升 (IgG趋势检验χ2 =16 .376 ,P =0 .0 0 0 0 5 ;IgM趋势检验χ2 =2 8.736 ,P =0 .0 0 0 0 0 )。IFA法用于检测SARS患者发病 10天后血清抗体 ,结果显示灵敏度、特异度及与临床诊断的符合率均在 90 %以上。结论 IFA法适于SARS发病 10天后作为实验室辅助诊断方法。
- 方立群张泮河杨宝安吴晓明赵秋敏刘玮刘洪邓永强詹琳韩伟国吕富双吴劲松杨红祝庆余曹务春
- 关键词：传染性非典型肺炎
- SARS动物模型的研究被引量：3
- 2004年
- 利用分离的SARS CoV毒株BJ 0 1,经滴鼻等途径感染大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等 5个种属的动物 ,筛选对SARS易感的小动物。在此基础上 ,选择食蟹猴和恒河猴进行SARS的人工感染实验 ,评价其作为SARS动物模型的可能性。结果表明 ,大鼠、豚鼠、黑线仓鼠、白化仓鼠和雏鸡等动物对SARS均不易感 ,感染后未观察到任何的临床及病理学改变 ,不过从感染 2周后的大鼠和豚鼠的肺和咽等组织样本中检测到了的特异的核酸 ,提示SARS CoV能够在这两种动物的体内复制。从感染猴子的分泌物和脏器中分离出了病毒 ,证明SARS CoV也能够在猴子体内复制。临床和病理组织学检查结果显示 ,SARS病毒接种食蟹猴和恒河猴后 ,可以引起所有实验猴发生间质性肺炎 ,其病理学改变与人类感染SARS病毒后肺部病变近似 ,但病变的严重程度比较人类的轻得多 ,除此之外无任何其它的明显的临床表现及组织病理学改变 ,按照动物模型的指标判断食蟹猴和恒河猴并不是SARS的理想动物模型 ,不过在目前尚没有更理想的动物模型情况下 ,以间质性肺炎为病理学检查指标 。
- 刘伯华吴东来战大伟秦鄂德祝庆余王翠娥孟庆文杨银辉尹训南韩伟国关云涛彭文明李昌文刘永刚王牟平刘全贵施慧颖丁志芬
- 关键词：SARS-COV恒河猴病理学改变雏鸡食蟹猴断食
- 汉坦病毒H8205株G1P基因片段重组杆状病毒表达载体的构建及表达
- 2005年
- 将汉坦病毒H8205株G1P基因的保守序列(约1000bp)作为目的基因插入到BactoBac杆状病毒表达系统的pFastBacHTb供体质粒中,利用Tn7转座子同BacmidDNA同源重组,获得了含目的基因片段的重组杆状病毒DNA,并利用其转染Sf9昆虫细胞,72h后收集细胞悬液,再用该悬液侵染Sf9昆虫细胞,48h后收获病毒.采用IFA分析收获的产物,观察到了特异性的荧光,并且采用SDSPAGE和Western印迹也获得了与预期一致的结果.证明感染后的Sf9昆虫细胞所表达的蛋白中含有能与抗汉坦病毒H8205株多克隆抗体特异性结合目的蛋白.研究表明,采用杆状病毒表达系统可以成功表达出汉坦病毒H8205株包膜糖蛋白G1基因片段,为开发适合的以G1P为抗原的汉坦病毒诊断试剂进行了前期的探索.
- 谭刚常国辉刘伯华刘洪韩伟国吕富双康晓萍张雨杨保安秦鄂德祝庆余
- 关键词：汉坦病毒H8205株杆状病毒表达系统
