刘宗晓
- 作品数：11 被引量：38H指数：4
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- 一步法环媒恒温扩增（RT-LAMP）技术检测鲤春病毒血症病毒（SVCV）方法的建立和应用
- 本文建立了一步法环媒恒温扩增技术（RT-LAMP）检测鲤春血症病毒（SVCV）的方法。根据SVCV糖蛋白基因的保守序列,设计两个内引物和两个外引物,通过简单易行的LAMP扩增技术,对SVCV进行检测。其扩增条件优化结果为...
- 刘宗晓刘荭李惠芳吕建强田飞焱高隆英江育林谢从新
- 关键词：RT-LAMP
- 文献传递
- 6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析被引量：2
- 2008年
- 根据已报道的鱼类病毒性神经坏死病毒（viral nervous necrosis virus,VNNV）衣壳蛋白基因（coatprotein gene,cp基因）设计引物,对2006年从我国沿海养殖石斑鱼中分离到的6株鱼类神经坏死病毒进行RT-PCR扩增,特异性扩增出6株病毒的完整衣壳蛋白基因,分别连接到pMD18-T载体中,并进行序列测定和分析。结果发现,6个VNNV分离株的cp基因核苷酸序列的同源性在97.3%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%～99.1%之间。根据cp基因核苷酸序列绘制分子进化树,发现6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒（ECNNV）、巨石斑鱼神经坏死病病毒（ET-NNV）及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒（MGNNV）亲缘关系较近。试验结果表明,目前我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中广泛传播流行。
- 田飞焱吕建强刘荭李惠芳刘宗晓陈昌福
- 关键词：衣壳蛋白基因
- 甲鱼虹彩病毒的环介导等温扩增检测方法和试剂盒
- 本发明公开了甲鱼虹彩病毒(STIV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法和试剂盒，其中所用的外引物分别含有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的序列。本发明为甲鱼虹彩病毒的检测提供快速、敏感、特异的检测方法...
- 何俊强刘宗晓郑晓聪刘荭高隆英兰文升
- 文献传递
- 鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用被引量：9
- 2008年
- 根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法。利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒,结果只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.2pg/μL的总RNA。与RT-PCR的灵敏度对比试验表明,其敏感度比RT-PCR高100倍。对同一样品进行检测,在组内及组间的变异系数分别为0.9%以及1.5%,证实其重复性极好,并且从抽提核酸到得出结果仅需4h。对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测,结果发现有40份阳性样品。这些结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高的优点,是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。
- 罗卫李惠芳刘荭陈焕春范万红刘宗晓田飞焱王侃吕建强
- 关键词：实时荧光RT-PCR
- 猪呼吸道疾病综合征的病因分析与防控
- 2010年
- 在我国养猪业由分散、传统、数量型向集约、规模、质量型转变的过程中,我国猪病综合防制体系还不够完善,疫苗研制和药物保健相对滞后,导致猪病日渐增多且日趋复杂,形成了呼吸道综合征、繁殖障碍综合征及肠道综合征等三大系统性疫病,尤其是猪呼吸道疾病在规模化猪场十分普遍。细菌、病毒、支原体及寄生虫等病原性因素和不良环境因子、应激及低下的免疫力等非病原性因素,都可诱发、
- 梁兆强刘宗晓李建丽
- 关键词：猪呼吸道疾病综合征病因分析繁殖障碍综合征呼吸道综合征规模化猪场药物保健
- 锦鲤疱疹病毒病的研究进展被引量：14
- 2006年
- 刘宗晓刘荭江育林
- 关键词：疱疹病毒病锦鲤DNA聚合酶基因膜蛋白基因衣壳蛋白基因DNA病毒
- 鱼类病毒性神经坏死病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性被引量：8
- 2008年
- 利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中,构建了pFastBac-cp质粒。转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒AcNPV-cp。利用AcNPV-cp感染Sf9细胞后,SDS-PAGE分析可见大小约为37ku的特异性蛋白带,Western-blotting分析发现,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带。试验结果表明,AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白,其具有良好的免疫学活性。负染电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样颗粒,其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒。制备超薄切片后电镜观察发现,CP蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中。为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础。
- 罗卫田飞焱刘荭陈焕春李惠芳刘宗晓王侃蔡伊娜吕建强
- 关键词：衣壳蛋白病毒样颗粒
- 鲑鱼肾杆菌实时荧光RT-PCR检测方法和试剂盒
- 本发明建立了检测鲑鱼肾杆菌的Taq Man实时荧光定量PCR，优化反应条件，经特异性、敏感性及临床应用试验，表明该方法特异性强，敏感度高，适于鲑鱼肾杆菌的快速诊断和口岸检疫，也为鲑科鱼类的疫病调查、鲑鱼肾杆菌的流行病学研...
- 何俊强刘宗晓史秀杰刘荭兰文升高隆英
- 杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用被引量：5
- 2008年
- 选取杀鲑气单胞菌A层A蛋白(VapA)保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针。以ATCC标准株10倍系列稀释,通过血球计数板计数后进行实时定量PCR,制作标准曲线。通过SDS软件获得细菌数量(X)与Ct值的关系为:Ct=-3.1574lgX+43.6841(相关系数R2=0.992)。实时定量PCR的检测限为6个细菌。建立的方法对杀鲑气单胞菌典型株和非典型株具有较好的特异性,与其他细菌没有交叉反应。杀鲑气单胞菌实时定量PCR方法的建立,对于快速口岸检疫、临床诊断和疫病监测具有重要的应用价值。
- 刘宗晓刘荭史秀杰高隆英岳志芹吕建强何俊强江育林谢从新
- 关键词：杀鲑气单胞菌实时定量PCRTAQMAN探针
- 甲鱼虹彩病毒的环介导等温扩增检测方法和试剂盒
- 本发明公开了甲鱼虹彩病毒(STIV)的环介导等温扩增(LAMP)检测方法和试剂盒，其中所用的外引物分别含有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的序列。本发明为甲鱼虹彩病毒的检测提供快速、敏感、特异的检测方法...
- 何俊强刘宗晓郑晓聪刘荭高隆英兰文升
