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1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定被引量：20: 2012年; 从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。; 邓宇孙春清张宏彪蔺涛张荣龙进学黄律曹三杰袁世山文心田郑浩; 关键词：牛病毒性腹泻病毒进化分析

猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株细胞传代研究被引量：1: 2012年; 为研究猪源牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)生物学特性,将本实验室分离得到的SD0803毒株在马-达氏牛肾细胞(mardin-darby bovine kidney,MDBK)上连续传40代,提取第40代病毒基因组RNA,设计扩增及测序引物,用RT-PCR方法分5段扩增第40代病毒基因片段,并进行全长测序,利用DNASTAR软件进行序列拼接及分析,与亲代病毒SD0803序列比对分析;用Real-time PCR方法测定第1、10、20、30和40代细胞上清中的病毒复制效率,并绘制多步生长曲线。测序结果表明,第40代病毒与亲代病毒核苷酸序列的同源性为99.8%,氨基酸序列的同源性为99.6%,其中有23处发生核苷酸突变,14处为有义突变,氨基酸变化主要集中在E2和NS5B区域。多步生长曲线显示,传代病毒和亲本病毒均能在MDBK细胞上获得较高的复制效率,并有着相似的生长特性,复制效率基本一致。本次研究为研制猪源BVDV疫苗做好了物质储备,为下一步研究其致病性和抗原性奠定基础。; 孙春清邓宇张宏彪龙进学韦祖樟童光志袁世山; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 REAL-TIMEPCR

猪博卡病毒在我国部分地区的分子流行病学调查及其荧光定量PCR方法的建立与应用: 细小病毒科中博卡病毒属成员具有特征性的第三个开放阅读框(Open ReadingFrame，ORF)，其中猪博卡病毒(Porcine bocaviruses，PBoVs)表现出最强的遗传多样性。基于衣壳蛋白(Capsid...; 张宏彪; 关键词：病毒分类流行病学调查多克隆抗体组织嗜性荧光定量PCR; 文献传递

猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备被引量：1: 2012年; 表达去除SD0803E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础。RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。采用间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光等方法鉴定获得的抗体。结果显示,抗体效价最高可达1∶256 000;制备的抗体可与rsE2蛋白特异性结合;该抗体可特异性识别BVDV感染MDBK细胞表达的E2蛋白,显示抗体高度的特异性。成功构建pGEX-4T-1-sE2原核表达质粒,诱导其表达的蛋白免疫家兔,成功制备的猪源BVDV SD0803株E2抗体。; 邓宇蔺涛孙春清张宏彪张荣龙进学黄律文心田曹三杰童光志袁世山郑浩; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白抗体制备

猪细小病毒4型在试验猪的感染进程及在组织中的分布研究被引量：1: 2012年; 研究猪感染猪细小病毒4型(porcine parvovirus type 4,PPV4)后的症状、血清中病毒DNA拷贝数的变化以及病毒在猪体内的分布,并研究病毒对猪器官组织的嗜性。对试验猪接种PPV4阳性血清,观察PPV4感染猪后的临床症状以及脏器病理变化,利用已建立的PPV4 Taqman荧光定量PCR检测方法,定量检测人工感染试验猪血清和各脏器中PPV4 DNA拷贝数。PPV4感染猪呈现病毒血症,在8d后血清中病毒含量最高,之后逐渐降低。试验猪感染PPV4后前期主要是呼吸道症状,之后好转,无其他症状。试验猪主要的病理变化在于肺脏淤血以及全身淋巴结肿大。PPV4可以侵害试验猪多个器官,前期在肺脏以及扁桃体中PPV4 DNA含量较高,后期在肠道以及泌尿道含量较高。血清富集PPV4病毒电镜观察可见疑似PPV4病毒粒子。试验证明,PPV4具有快速感染性,PPV4对猪并无致死性,主要影响生产性能,对肺脏以及肠道器官组织的嗜性最强。; 黄律龙进学张宏彪袁世山徐大为刘婷婷; 关键词：荧光定量 PCR

猪圆环病毒2型对体外培养的仔猪淋巴细胞抗氧化能力的影响被引量：1: 2008年; 为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV-2)引起淋巴细胞凋亡的机理,测定了PCV-2对体外培养的仔猪淋巴细胞抗氧化能力的影响。取培养后0,2,6,24,48 h的上清液和细胞,用试剂盒测定上清液中总抗氧化能力、一氧化氮(NO)含量、超氧阴离子自由基活性和超氧化物岐化酶活力的变化,同时测定淋巴细胞内一氧化氮合酶(NOS)活力。结果表明,试验组与对照组总抗氧化能力无显著性差异(P>0.05);试验组抗超氧阴离子自由基活性与对照组相比,除了0 h,其他时间点试验组均显著高于对照组(P<0.05);总超氧化物岐化酶活力试验组和对照组均维持在19 U/mL左右,无显著差异(P>0.05);NO含量除24 h时试验组高于对照组外(P<0.05),其余时间两组间差异不显著;细胞内NOS活力除0 h外,其余时间均是对照组高于试验组,且2、24 h显著增高(P<0.05);对照组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力6 h时显著高于试验组(P<0.05),其余时间(0 h除外)也较试验组高。; 张宏彪韩惠利刘世超陈荣荣李浩扬张书霞; 关键词：猪圆环病毒2型淋巴细胞抗氧化能力仔猪

猪博卡病毒的分子流行病学研究: 袁世山龙进学翟少伦黄律张宏彪; 猪博卡病毒被认为是仔猪呼吸道及消化道疾病的主要病原之一，常导致仔猪呼吸衰竭死亡及腹泻脱水死亡。该病没有有效的治疗方案，常给养殖场带来巨大的经济损失。该项目针对猪博卡病毒的分子流行病学进行研究，来探索猪博卡病毒在中国的流行...; 关键词：; 关键词：分子流行病学

2006~2011年我国部分地区猪细小病毒4型流行病学研究: 目的：研究分析新发病毒猪细小病毒4型（PPV4）在我国的流行情况、全序列特征。　　方法：基于本实验室建立的PPV4PCR检测方法，检测了从2006年到2011年收集的931份临床病料，并扩增了PPV4全序列并进行分析。　...; 黄律张宏彪蔺涛邓宇龙进学袁世山; 关键词：猪细小病毒流行病学调查

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张宏彪