温见翔
- 作品数：48 被引量：71H指数：5
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化
- 目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白, 并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T 载体,PCR筛选阳性克隆并测...
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善雷明军潘晖榕林绮萍张仁利高世同黄达娜
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6纯化
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化
- 目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白, 并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T 载体,PCR筛选阳性克隆并测...
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- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6纯化
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化被引量：5
- 2004年
- 目的 构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT -6蛋白的重组表达质粒 ,并对其表达产物进行纯化。 方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组中扩增出ESAT -6基因片段 ,克隆至pMD18-T载体 ,PCR筛选阳性克隆并测序 ;用限制性内切酶消化后 ,目的片段亚克隆至表达载体pET -2 3a(+ ) ,构建pET -ESAT -6重组质粒 ,将其转化入大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ;PCR和双酶切鉴定转化菌落 ;将阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS -PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达 ;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白。 结果 从结核分枝杆菌H3 7Rv基因组DNA中扩增出ESAT -6基因片段 ,成功构建重组表达质粒pET -ESAT -6,SDS -PAGE显示表达产物分子量约为 6kD ,经亲和纯化后的ESAT -6重组蛋白纯度高 ,且能被结核病人血清所识别。 结论 利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT -6重组蛋白 ,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕张仁利高世同黄达娜
- 关键词：ESAT-6结核分枝杆菌原核表达系统重组表达质粒阳性克隆IPTG
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化
- 目的构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段, 克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳...
- 温见翔吴少庭陈群秦莉袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕张仁利高世同黄达娜
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6纯化
- 162例次腹膜透析相关性腹膜炎病原学分析被引量：3
- 2021年
- 目的研究该院腹膜透析相关性腹膜炎透出液的病原菌培养鉴定结果、涂片革兰染色镜检结果、耐药情况,为腹膜透析相关性腹膜炎的临床诊断、治疗、预后及实验室检查提供数据支持。方法回顾性分析2014年1月至2019年4月该院收治的124例腹膜透析相关性腹膜炎患者共162次透出液的病原菌分布、涂片革兰染色镜检结果、耐药情况。结果 162例次透出液检测中,115例次透出液培养阳性,阳性率71.0%。培养出126株病原菌,其中83株革兰阳性球菌(65.9%),34株革兰阴性杆菌(27.0%),6株真菌(4.8%),2株革兰阴性球菌,1株革兰阳性杆菌。115例次透出液培养阳性的腹膜炎患者中有78例次同步送检涂片革兰染色,其中34例次阳性,阳性率43.6%。在病原菌耐药性方面,48.0%葡萄球菌耐苯唑西林,4.8%链球菌耐青霉素,54.5%肠杆菌目细菌耐第3、4代头孢菌素。结论在该院,腹膜透析相关性腹膜炎病原菌以革兰阳性球菌为主;在透析相关性腹膜炎诊治中,应重视透出液涂片革兰染色镜检;应根据病原菌监测情况进行经验性抗菌药物的选择。
- 杨会林闫津津温见翔陈娟文明明余昊周丽娜
- 关键词：腹膜透析腹膜炎病原学
- 弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究被引量：8
- 2005年
- 目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪高世同张仁利黄达娜袁仕善雷明军温见翔潘晖榕秦莉
- 关键词：弓形虫DNA免疫小鼠
- 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化
- 2004年
- 构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化.用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pET-23a(+),构建pET-esat-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3);PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白.从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出esat-6基因片段,成功构建重组表达质粒pET-esat-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别.利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础.……
- 温见翔吴少庭陈群秦莉林绮萍袁仕善张仁利高世同黄达娜
- 弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究
- 目的用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性作用。方法大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,以pVAC空质粒及不经任何处...
- 林绮萍吴少庭翁亚彪高世同张仁利黄达娜袁仕善雷明军温见翔潘晖榕秦莉
- 关键词：弓形虫DNA免疫
- 文献传递
- 弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位 ,并探讨其免疫保护效果。 方法 用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体 12肽库进行三轮筛选 ,对获得的日的噬菌体用间接ELISA和Dot -ELISA检测其特异性 ,并对其中的某些克隆进行Western -blot分析和序列测定 ;用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL/c小鼠 ,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度 ,攻击感染后观察小鼠存活情况。 结果 经三轮筛选 ,特异性噬菌体得到富集 ,随机挑取 18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定 ,有 16个克隆能与弓形虫免疫兔血清lgG呈特异性反应。Western -blot分析显示P2克隆能被免抗弓形虫血清所识别 ,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性 ,其序列为 5’ -CTTCAGTTGGATCGGGCTCCGTTTTGGAATCAGGGT -3’ ,与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性 ;与原肽库对照组相比 ,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体 ,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组。 结论 利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位 ,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用。
- 林绮萍吴少庭翁亚彪袁仕善温见翔张仁利高世同黄达娜雷明军潘晖榕秦莉
- 关键词：弓形虫小鼠表位噬菌体抗原感染后间接ELISA
- SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究
- 目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白（S蛋白）的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1 和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SAR...
- 秦莉吴少庭王西明袁仕善林绮萍雷明军潘晖榕黄达娜温见翔高世同张仁利屈伸
- 关键词：SARS冠状病毒DNA疫苗
