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张继帅: 作品数：19 被引量：24H指数：3; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术农业科学更多>>

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Cre重组酶在心肌细胞特异性转基因小鼠中的功能检测: 2005年; 目的:检测Cre重组酶在心肌细胞特异性Cre重组酶转基因小鼠(α-MHC-Cre)中的组织分布及其在体内介导基因重组的作用。方法:将α-MHC-Cre转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,利用LacZ染色对双转基因阳性子代小鼠进行检测。然后,将α-MHC-Cre小鼠与Sm ad4条件基因打靶小鼠交配,利用PCR和Southern杂交对Cre重组酶介导重组的组织特异性进行检测。结果:LacZ染色表明,Cre重组酶只在心肌细胞中特异性表达并介导ROSA位点LoxP序列间的重组。PCR和Southern结果显示Cre重组酶只在心肌细胞中特异地剔除了Sm ad4基因,进一步验证了Cre重组酶在心肌细胞中发挥介导LoxP位点重组的作用。结论:α-MHC-Cre转基因小鼠具有良好的组织特异性,只在心肌细胞中表达Cre重组酶,并能在体内成功地介导心肌细胞基因组上LoxP位点间的重组,是一种理想的研制心肌细胞特异性基因剔除小鼠的工具小鼠。; 王剑张继帅侯宁滕艳程萱杨晓; 关键词：心肌细胞 CRE重组酶

TGF-β超家族分子在软骨内成骨中的作用: 2004年; 转化生长因子 β(transforminggrowthfactor β ,TGF β)超家族分子包括TGF β、骨形态发生蛋白 (BMP)等30多个成员。它们在软骨组织分布广泛 ,在软骨内成骨的各个阶段皆具有重要功能。TGF β分子可以促进软骨细胞细胞外基质合成 ,抑制软骨细胞的肥大分化和矿化。BMP分子可以诱导间充质细胞分化为软骨细胞 ,促进合成细胞外基质 ,抑制软骨细胞的终末分化。另外 ,TGF β、BMP分子可以和IHH PTHrP信号通路相互作用协调软骨细胞分化 ,BMP和FGF分子相互拮抗控制软骨细胞增殖、IHH分子表达和软骨细胞的终末分化。但是 ,TGF β超家族分子在软骨内成骨中的详细作用机制仍需进一步的研究来阐明。; 张继帅杨晓; 关键词：转化生长因子Β 骨形态发生蛋白质类软骨内成骨软骨细胞细胞外基质

转化生长因子β调节血管平滑肌细胞分化和表型转换的研究进展被引量：1: 2012年; 转化生长因子β(TGF-β)超家族是一类分泌型多肽信号分子,在调节细胞生长、分化、凋亡和组织稳态方面具有重要功能。对于血管平滑肌细胞,TGF-β可以促进前体细胞向平滑肌细胞分化和维持平滑肌细胞的收缩表型;TGF-β信号通路异常可以引起家族性动脉瘤,如Marfan综合征和Loeys-Dietz综合征等。我们简要综述了TGF-β在调节血管平滑肌细胞分化和表型转换过程中的分子机制研究进展,以及TGF-β调节的平滑肌细胞分化和表型转换异常在动脉瘤中的作用。; 句仁杰张继帅张鹏杨晓吴长德; 关键词：转化生长因子Β 血管平滑肌细胞分化表型转换动脉瘤

血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立(英文)被引量：3: 2005年; 血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠,利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和SouthernBlot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布,我们将Tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。Tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示,Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP间的重组。Tie2-Cre;ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示,Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此,Tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。; 李文龙程萱谭晓红张继帅孙岩松陈林杨晓; 关键词：TIE2 血管内皮细胞 CRE-LOXP 转基因小鼠 CRE重组酶特异表达 CRE-LOXP

Altered Gene Expression in Articular Chondrocytes of Smad3^(ex8/ex8) Mice, Revealed by Gene Profiling Using Microarrays被引量：2: 2007年; It has been previously reported that small mother against decapentaplegic 3 （Smad3） gene knockout （Smad3^ex8/ex8） mice displays phenotypes similar to human osteoarthritis, as characterized by abnormal hypertrophic differentiation of articular chondrocytes. To further clarify the crucial target genes that mediate transformation growth factor-β （TGF-β）/Smad3 signals on articular chondrocytes differentiation and investigate the underlying molecular mechanism of osteoarthritis, microarrays were used to perform comparative transcriptional profiling in the articular cartilage between Smad3^ex8/ex8and wild-type mice on day five after birth. The gene profding results showed that the activity of bone morphogenetic protein （BMP） and TGF-β/cell division cycle 42 （Cdc42） signaling pathways were enhanced in Smad3^ex8/ex8 chondrocytes. Moreover, there was altered gene expression in growth hormone/insulin-like growth factor 1 （Igfl） axis and fibroblast growth factor （Fgf） signaling pathway. Notably, protein synthesis related genes and electron transport chain related genes were upregulated in Smad3^ex8/ex8 chondrocytes, implying that accelerated protein synthesis and enhanced cellular respiration might contribute to hypertrophic differentiation of articular chondrocytes and the pathogenesis of osteoarthritis.; 王浩张继帅孙强杨晓; 关键词：SMAD3 OSTEOARTHRITIS MICROARRAY

Rackl保护N末端磷酸化的c-Jun不被泛素连接酶Fbw7降解: c-Jun转录因子是非常不稳定的蛋白,三种泛素连接酶Fbw7、Itch、COP1可以介导c-Jun的泛素化和降解。然而,c-Jun作为JNK激酶功能的主要介导者,其被JnK磷酸化后,不仅转录活性增强,并且变得更加稳定,这...; 张继帅朱峰李翔李圣青董子刚; 文献传递

软骨细胞特异性Smad4基因剔除导致小鼠长骨发育异常: 骨骼的形成方式包括:膜内成骨和软骨内成骨。软骨内成骨是一个软骨组织被骨组织代替的过程,即在将要形成骨骼的部位先形成软骨组织,然后,软骨组织中央的软骨细胞发生肥大分化、凋亡,随之成骨细胞、破骨细胞、血管内皮细胞和间充质细胞...; 张继帅郝振明谭晓红王友亮毛春明吕娅歆程萱杨晓; 关键词：基因剔除小鼠 SMAD4 软骨细胞生长板; 文献传递

Smad3基因剔除导致小鼠发生骨质疏松被引量：3: 2006年; 目的和方法为了研究Smad3基因的功能,用基因打靶的方法建立了Smad3基因剔除小鼠。通过分析小鼠的表型,发现Smad3基因剔除小鼠主要表现为骨关节炎和粘膜免疫缺陷,我们进一步分析了小鼠骨骼方面的表型。取出生后4 d和4周的Smad3基因剔除和野生型小鼠的膝关节,脱钙,石蜡包埋,切片,进行H&E染色观察它们的微观结构。发现在4 d时,基因剔除小鼠和野生型小鼠相比,胫骨短小。在4周时可以观察到基因剔除小鼠骨小梁稀疏,骨小梁体积变小。另外,还发现在Smad3基因剔除小鼠胫骨的皮质骨宽度明显小于野生型小鼠。通过X射线和测量6周龄小鼠股骨的骨密度和骨矿含量。结果结果显示Smad3基因剔除小鼠的骨密度和骨矿含量均低于野生型小鼠。这些结果表明Smad3基因剔除导致小鼠发生骨质疏松。利用原位杂交检测成骨细胞的标志分子-骨钙素、碱性磷酸酶和骨桥素基因表达降低,提示成骨细胞减少。用RT-PCR检测到核结合因子2、骨涎蛋白、骨钙素I、型胶原在基因剔除小鼠表达降低,而胸腺中的IFN-γ表达降低。用TRAP染色来检测出生后8 d的Smad3基因剔除小鼠骨切片中破骨细胞,并且用Osteometrics公司的骨计量软件分析骨切片,结果表明基因剔除小鼠的NOc/TAr(破骨细胞数目/单位骨小梁面积)、OCs/Bs(破骨细胞表面积/骨表面积)和NOc/BPm(破骨细胞数目/单位骨面积)等指标均高于野生型小鼠。为了进一步验证基因剔除小鼠的破骨细胞的分化受到影响,分离Smad3和野生型小鼠的骨髓细胞,向破骨细胞的方向进行诱导分化,TRAP染色结果表明基因剔除小鼠的骨髓细胞分化成破骨细胞数目显著多于野生型小鼠。结论Smad3基因剔除引起成骨细胞数量减少,破骨细胞数目增多,从而导致小鼠骨小梁稀疏、骨密度降低,引起骨质疏松。; 李文龙谭晓红张继帅杨蕾蕾孙岩松杨晓; 关键词：SMAD3 成骨细胞破骨细胞骨质疏松

Smad4基因在野生型和基因缺陷小鼠耳蜗内的定位和分布被引量：4: 2006年; 目的检测Smad4基因在成年小鼠耳蜗中是否有表达及表达部位的分布情况,以进一步研究Smad4基因在内耳发育以及听功能调控上的作用。方法动物由军事医学科学院发育和疾病遗传学研究室杨晓研究员提供,动物获取是在C57BL/6J和Blackswiss两种遗传背景的小鼠应用Cre-LoxP系统进行条件基因打靶,于小鼠胚胎早期在软骨细胞内将Smad4基因剔除。并生成同窝三种基因型小鼠—野生型Smad4+/+,杂合子Smad4+/-,纯合子Smad4-/-用于本研究。对同窝三种不同基因型小鼠的耳蜗冰冻切片应用免疫组织化学方法染色观察,阴性对照为野生型小鼠耳蜗的冰冻切片并用PBS代替一抗,阳性对照为小鼠肾脏组织冰冻切片。结果Smad4在三种基因型小鼠耳蜗均有广泛表达,表达部位主要集中于血管纹、螺旋韧带、基底膜、盖膜、毛细胞、支持细胞、螺旋神经节细胞等处,其中血管纹和基底膜表达最为明显。Smad4在野生型和杂合型小鼠的耳蜗内表达情况基本一致,但纯合子小鼠耳蜗内表达与前两者相比为较低的水平,但未完全消失。结论Smad4在正常小鼠的耳蜗广泛存在,该基因是耳蜗中广泛表达的蛋白中的一种。作为Bmp4信号通路下游信号因子,它可能在骨性耳蜗的形成、内耳感觉细胞的分化成熟过程中起着重要的作用。; 侯昭晖杨仕明胡吟燕郭维孙建和于宁张继帅杨晓韩东一杨伟炎; 关键词：SMAD4 基因缺陷耳蜗

Smad4条件基因敲除小鼠听功能初步研究被引量：9: 2006年; 目的对Smad4条件基因敲除后三种不同基因型小鼠野生型+/+、杂合子+/-、纯合子-/-进行听功能检查,初步确定Smad4条件基因敲除后小鼠的听力学表型特征。方法对Smad4条件基因敲除后同窝出生的三种不同基因型小鼠野生型+/+、杂合子+/-、纯合子-/-分别进行听性脑干反应(ABR)和听神经复合动作电位(CAP)的检查,判断Smad4条件基因敲除后三种基因型小鼠是否有听力的改变;如果听力有所改变,再将两种方法相结合以综合判断听力改变可能的病理部位。结果各个月龄的Smad4条件基因敲除后的纯合子小鼠各频率的ABR阈值均在100dBSPL以上,有的甚至在最大给声刺激都无法引出可识别的波形。野生型和杂合子小鼠都可以诱发出可辨别、可重复的ABR波形。听神经动作电位的结果与脑干诱发电位结果相似,纯合型小鼠各个频率均未引出动作电位波形,另外两种基因型小鼠可以引出稳定的CAP波形。结论Smad4条件基因敲除后小鼠由于基因的缺陷而出现了重度感音神经性耳聋,纯合子小鼠出现全聋。; 侯昭晖杨仕明郭维胡吟燕孙建和于宁张继帅杨晓韩东一杨伟炎; 关键词：SMAD4 听性脑干反应听神经复合动作电位听力

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