翟羽
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 人β-防御素3与杀菌/通透性增加蛋白重组腺病毒载体及其转染C3H10T1/2细胞的构建
- 2015年
- 目的构建人β-防御素3(h BD3)与杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的重组腺病毒载体p Adxsi-BPIBD3,并转染鼠胚胎间充质干细胞系(C3H10T1/2),观察融合蛋白的表达。方法酶切原始质粒,得到BPI-BD3片段,连接到p Shuttle-CMV得到p Shuttle-BPI-BD3,验证后将插入片段转移至p Adxsi载体构建重组腺病毒质粒,线性化后转染HEK293细胞,扩增纯化后,TCID50测定重组腺病毒滴液。p Adxsi-BPI-BD3及空载体p Adxsi(作为对照组)转染C3H10T1/2。RT-PCR、Western blot检测BPI-BD的表达;MTT法检测其对细胞增殖的影响。结果成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,纯化后病毒滴度达1.2×1010pfu/ml。p AdxsiBPI-BD3转染C3H10T1/2后,RT-PCR、Western blot结果显示,BPI-BD3融合蛋白表达成功。MTT结果显示,转染的C3H10T1/2生长无明显影响(P>0.05)。结论成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,且转染C3H10T1/2后可稳定表达BPI-BD3融合蛋白,为进一步研究应用抗菌肽BPI-BD3奠定基础。
- 张欣然刘翠钱智勇翟羽郭希民郭红延
- 关键词：腺病毒载体
- 兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(r BMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势。方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养r BMMSCs,采用简单制备方法构建r BMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察,MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况。结果:成功分离r BMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的r BMMSCs;RT-PCR结果显示,与r BMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn。结论:r BMMSCs细胞膜片相比普通培养的r BMMSCs,在组织工程应用中更具优势。
- 刘翠张欣然刘东华翟羽郭希民郭红延
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞外基质
- 维生素C对兔骨髓间充质干细胞成脂分化的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨维生素C（vitamin C,Vc）对兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成脂分化能力的影响。方法以兔BMSCs为实验对象,添加0~150μg/ml不同浓度的Vc处理后,进行成脂诱导,镜下观察诱导4 d、7 d、10 d、14 d、21 d的脂肪形成情况,并利用油红-O染色提取法检测其脂肪含量,实时荧光定量PCR（q PCR）法检测成脂相关转录因子PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA表达的变化。结果相比未添加Vc组,不同浓度的Vc均能增加BMSCs成脂量和成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达。其中50μg/ml Vc处理组OD值高达1.373±0.099,高于其他组（0.720±0.011、0.879±0.023、0.915±0.159、1.088±0.066、0.908±0.162）,差异有统计学意义（P〈0.01）,而该组PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达最高水平分别为5.82±0.24、5.41±0.42、5.14±0.54,与其他组差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 Vc可以促进MSCs的成脂分化且最佳浓度为50μg/ml。
- 刘翠张欣然刘东华周勇翟羽郭希民郭红延
- 关键词：维生素C间充质干细胞成脂分化
