- TLR2/MyD88信号系统在大鼠角膜移植术后排斥反应中的作用被引量：5
- 2015年
- 目的探讨Toll样受体2(Toll like receptor,TLR2)/MyD 88信号系统在大鼠角膜移植术后排斥反应中的作用。方法取14只SD大鼠为供体,28只Wistar大鼠为受体,建立28个同种异体穿透性角膜移植模型。建模后分为同种异体角膜移植组14只(6只用于术后观察排斥情况),同种异体角膜移植TLR2单克隆抗体组14只(6只用于术后观察排斥情况)。另选16只Wistar大鼠,分为同种自体角膜移植组8只,正常对照组8只。3个手术组大鼠分别行穿透性角膜移植术。术后TLR2单克隆抗体组给予0.5 g·L-1TLR2单克隆抗体,分别于术后0 d、2 d、4 d、6 d、8 d分5次经球结膜下注射给药。正常对照组、同种自体角膜移植组及同种异体角膜移植组给等量生理盐水。术后每天于裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管,并用排斥反应指数评分。第9天取材,行HE、免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测。结果术后随时间变化各手术组角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊和新生血管生长,以同种异体角膜移植组最为明显。HE染色结果显示在同种异体角膜移植组,角膜基质层出现水肿、大量炎症细胞浸润和新生血管,而在同种自体角膜移植组和TLR2单克隆抗体组中炎症反应较轻。免疫组织化学检测结果:TLR2和MyD 88分子在正常对照组、同种自体角膜移植组及TLR2单克隆抗体组的角膜上皮中均有微量表达,同种异体角膜移植组角膜上皮、基质细胞中TLR2和MyD 88分子的表达明显增多,尤以基质层明显。实时荧光定量PCR结果显示同种异体角膜移植组角膜组织TLR2 mR NA、MyD 88 mR NA的表达较同种自体角膜移植组(P=0.000、0.004)和正常对照组(P=0.000、0.000)显著增加,两者的表达亦较TLR2单克隆抗体组显著增加(P=0.000、0.003)。结论 TLR2单克隆抗体抑制TLR2及其下游信号分子MyD 88的表达;TLR2/MyD 88信号系统参与了角膜移植术后排斥反应,影响了角膜植片的
- 郑艳华白浪梁伟怡于健杨娟谭青
- 关键词：角膜移植免疫排斥
- 慢病毒介导TLR2基因沉默抑制角膜移植术后排斥反应的实验研究
- 本实验拟构建LV介导的TLR2-siRNA携带增强型绿色荧光蛋白(Enhancedgreen fluorescent protein，EGFP)的载体，先进行功能鉴定和滴度测定，随后展开以下研究。体外实验:(1)利用LV...
- 梁伟怡
- 关键词：角膜移植排斥反应TOLL样受体2基因沉默慢病毒载体
- 文献传递
- 慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究
- 2015年
- 目的观察慢病毒载体(lentiviral vector,LV)介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞(corneal epithelial cell,CEC)和基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性。方法分别培养大鼠CEC和CSC,转染组用携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的LV转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的LV。转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,选择eGFP表达最强的MOI进行后续实验,观察细胞形态,CCK8检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,RT-PCR检测转染后TLR2 mRNA的表达情况。结果 MOI=200时转染CEC和CSC荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;CCK8结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的IOD值差异均无统计学意义(均为P>0.05);流式细胞仪检测CEC和CSC转染效率分别为77.600% ±1.100%和76.300% ±1.387%,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。RT-PCR检测转染后CEC和CSC TLR2 mRNA相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。结论 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在体外稳定有效转染CEC和CSC,且对细胞安全性无影响,可有效下调TLR2 mRNA的表达。
- 梁伟怡白浪刘晶苏亚茹于健刘琼杨娟
- 关键词：慢病毒载体角膜细胞
- Toll样受体2调节Th细胞极化对小鼠角膜移植排斥反应发生的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探究Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)是否通过调节辅助性T细胞(T helper cells,Th)极化影响角膜移植排斥反应的发生。方法取30只C57BL/6小鼠和30只TLR2基因敲除小鼠为受体,BALB/c小鼠为供体,在受体小鼠右眼行同种异体角膜移植术,分别为野生组和基因敲除组;取19只C57BL/6小鼠右眼行自体角膜移植术,为自体组。术后每周两次裂隙灯下观察植片水肿程度和透明度,参照Sonoda评分标准对排斥指数(reject index,RI)进行评分;术后14 d收集角膜。分别取9只C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠作为野生对照组和基因敲除对照组,行常规HE染色和实时荧光定量PCR检测。结果术后随时间变化各手术组植片水肿和混浊程度不一,以野生组最为严重。角膜RI评分显示术后7 d、14 d、21 d,基因敲除组(0.80±0.83、0.90±0.55、1.35±0.99)低于野生组(1.55±0.94、2.25±0.97、2.55±1.19),差异均有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000)。HE染色显示,野生组角膜基质层出现水肿和大量炎性细胞;而基因敲除组和自体组炎症反应较轻。PCR检测显示,基因敲除组角膜Th1和Th17细胞因子(IFN-γ和IL^(-1)7)mRNA表达(1.94±0.34、2.62±0.30)比野生组(4.27±0.37、3.99±0.40)低,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001);Th2细胞因子(IL-4)三组差异无统计学意义(P>0.05)。结论敲除TLR2可能通过抑制Th向Th1和Th17极化,降低角膜移植排斥率。
- 苏亚茹白浪刘晶梁伟怡于健孟婷
- 关键词：TOLL样受体2免疫排斥TH1TH2
- TLR2单克隆抗体对大鼠角膜移植术后植片存活的保护作用被引量：2
- 2015年
- 背景 Toll样受体2（TLR2）在移植免疫相关疾病中的作用越来越受到关注,阻断TLR2对心脏和肾脏移植物的保护作用已有研究报道,但TLR2是否具有抑制角膜移植排斥反应的作用尚未证实.目的 观察TLR2单克隆抗体对同种异体大鼠角膜移植术后植片存活情况的影响.方法 取24只SPF级雌性Wistar大鼠作为受体,12只SPF级SD大鼠作为供体,体质量均为180～220 g.采用同种异体角膜移植的方法在Wistar大鼠右眼实施穿透角膜移植术,制备大鼠角膜移植模型.采用随机数字表法将模型眼分为单纯模型组和TLR2单克隆抗体组,TLR2单克隆抗体组分别于术后0、2、4、6、8d球结膜下注射TLR2单克隆抗体15 μg/30μl,单纯模型组大鼠同法注射等容量生理盐水.术后每日于裂隙灯显微镜下观察各组大鼠角膜植片水肿程度、透明度和新生血管形成情况,参照Holland等的评分标准对排斥反应指数（RI）进行评分;分别于术后第9天、第15天收集各组3只大鼠角膜组织,另取3只正常Wistar大鼠眼球作为正常对照,行常规组织病理学检查.各组取6只大鼠用于生存分析观察.结果 术后1～4 d,裂隙灯显微镜下2个组角膜均轻度水肿,术后9～14d,单纯模型组大鼠角膜植片布满新生血管,可见植片水肿、混浊,而TLR2单克隆抗体组大鼠植片至术后第15天开始混浊.术后5、9、15d,单纯模型组大鼠RI评分均明显高于TLR2单克隆抗体组,差异均有统计学意义（t=4.183、4.954、13.506,均P＜0.05）;TLR2单克隆抗体组角膜植存活时间为15.5d,95％可信区间（CI）为14.9～16.1,单纯模型组角膜植片存活时间为9.5d,95％ CI为8.7～10.3,2个组间差异有统计学意义（Z=12.728,P=0.001）.角膜组织病理学检查显示,单纯模型组大鼠角膜基质层水肿明显,角膜组织中可见大量炎性细胞浸润和新生血管管腔形成,而在TLR2单克隆抗体组中仅见少量炎性细胞和新生血管.结论 TLR2单克隆抗
- 白浪郑艳华梁伟怡
- 关键词：TOLL样受体2
