刘晶
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 敲除TLR2基因对同种异体小鼠角膜移植排斥反应的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨敲除Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)基因后是否抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。方法以BALB/c为供体,各取30只C57BL/6和同背景TLR2基因敲除鼠为受体行右眼角膜移植术,设为野生组(WT)和基因敲除组(KO);取19只C57BL/6行右眼自体角膜移植术,为自体组(ISO);各取9只C57BL/6和TLR2基因敲除鼠分别设为野生对照组(WT control)和基因敲除对照组(KO control)。术后每周两次观察植片并记录免疫排斥的发生时间;术后14 d,收集术眼同侧颈部淋巴结,行流式细胞术分析CD4+T细胞百分比;收集术眼角膜,行免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测角膜干扰素(interferon,IFN)-γ、TLR2和My D88的表达。结果 WT组和KO组小鼠角膜移植术后中位生存时间KO组(35.0±3.8)d长于WT组(21.0±1.5)d(P<0.05)。流式细胞术分析显示,WT组同侧颈部淋巴结CD4+T细胞百分比较WT control组明显增高(P<0.05),而ISO和KO组相对于其对应的control组(WT/KO control)差异均无统计学意义(均为P>0.05);免疫组织化学结果显示,ISO和KO组间角膜IFN-γ和My D88分子表达无差异,但两者均低于WT组。KO组角膜几乎不表达TLR2分子,ISO组有微量表达,WT组表达明显增高;PCR检测显示,ISO和KO组角膜IFN-γ和TLR2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05),但两者均低于WT组(均为P<0.05);KO组角膜My D88 mRNA相对表达量比ISO组高(P<0.05),但两者均低于WT组(均为P<0.05)。结论敲除TLR2基因可以一定程度抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。
- 苏亚茹白浪汤明芳于健刘晶孙宇飞孟婷
- 关键词：TOLL样受体2MYD88角膜移植免疫排斥CD4+T细胞
- 不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响被引量：3
- 2017年
- 目的研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响。方法原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L^(-1)组、30 mg·L^(-1)组、80 mg·L-1组(作用时间均为12 h);按照肽聚糖刺激时间分为12 h组、24 h组、36 h组(作用浓度均为30mg·L^(-1)),应用实时荧光定量PCR与流式细胞术检测各组TLR2、TLR4 mRNA和蛋白的表达量。结果与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,10 mg·L^(-1)组(4.35±0.46、3.53±0.50)、30 mg·L^(-1)组(8.06±0.72、5.31±0.34)、80 mg·L^(-1)组(2.93±0.46、2.23±0.04)的TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,12 h组(2.94±0.46、2.23±0.50)TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,各浓度组和12 h组角膜上皮细胞TLR2、TLR4蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论肽聚糖可以刺激小鼠角膜上皮细胞TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达增加,提示感染性角膜炎的发生、发展可能与角膜上皮细胞TLR2、TLR4识别病原体并参与炎症反应有关。
- 刘晶白浪苏亚茹于健孟婷陈敏婷
- 关键词：肽聚糖TOLL样受体家族角膜上皮细胞感染性角膜炎
- 慢病毒载体介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞和基质细胞的实验研究
- 2015年
- 目的观察慢病毒载体(lentiviral vector,LV)介导TLR2基因干扰大鼠角膜上皮细胞(corneal epithelial cell,CEC)和基质细胞(corneal stromal cell,CSC)的有效性和安全性。方法分别培养大鼠CEC和CSC,转染组用携带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和TLR2小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的LV转染,空白对照组加入空白培养液,阴性对照组加入不携带目的基因的LV。转染组按最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为10、50、100、200加入LV-TLR2-siRNA-eGFP,选择eGFP表达最强的MOI进行后续实验,观察细胞形态,CCK8检测细胞增殖情况。流式细胞仪检测两种角膜细胞的转染效率,RT-PCR检测转染后TLR2 mRNA的表达情况。结果 MOI=200时转染CEC和CSC荧光表达最高,和空白对照组相比细胞形态未发生明显改变;CCK8结果显示转染组与空白对照组、阴性对照组的IOD值差异均无统计学意义(均为P>0.05);流式细胞仪检测CEC和CSC转染效率分别为77.600% ±1.100%和76.300% ±1.387%,和阴性对照组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。RT-PCR检测转染后CEC和CSC TLR2 mRNA相对表达量均较对照组明显下降,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。结论 LV-TLR2-siRNA-eGFP可在体外稳定有效转染CEC和CSC,且对细胞安全性无影响,可有效下调TLR2 mRNA的表达。
- 梁伟怡白浪刘晶苏亚茹于健刘琼杨娟
- 关键词：慢病毒载体角膜细胞
- Toll样受体2调节Th细胞极化对小鼠角膜移植排斥反应发生的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探究Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)是否通过调节辅助性T细胞(T helper cells,Th)极化影响角膜移植排斥反应的发生。方法取30只C57BL/6小鼠和30只TLR2基因敲除小鼠为受体,BALB/c小鼠为供体,在受体小鼠右眼行同种异体角膜移植术,分别为野生组和基因敲除组;取19只C57BL/6小鼠右眼行自体角膜移植术,为自体组。术后每周两次裂隙灯下观察植片水肿程度和透明度,参照Sonoda评分标准对排斥指数(reject index,RI)进行评分;术后14 d收集角膜。分别取9只C57BL/6小鼠和TLR2基因敲除小鼠作为野生对照组和基因敲除对照组,行常规HE染色和实时荧光定量PCR检测。结果术后随时间变化各手术组植片水肿和混浊程度不一,以野生组最为严重。角膜RI评分显示术后7 d、14 d、21 d,基因敲除组(0.80±0.83、0.90±0.55、1.35±0.99)低于野生组(1.55±0.94、2.25±0.97、2.55±1.19),差异均有统计学意义(P=0.008、0.000、0.000)。HE染色显示,野生组角膜基质层出现水肿和大量炎性细胞;而基因敲除组和自体组炎症反应较轻。PCR检测显示,基因敲除组角膜Th1和Th17细胞因子(IFN-γ和IL^(-1)7)mRNA表达(1.94±0.34、2.62±0.30)比野生组(4.27±0.37、3.99±0.40)低,差异均有统计学意义(P=0.000、0.001);Th2细胞因子(IL-4)三组差异无统计学意义(P>0.05)。结论敲除TLR2可能通过抑制Th向Th1和Th17极化,降低角膜移植排斥率。
- 苏亚茹白浪刘晶梁伟怡于健孟婷
- 关键词：TOLL样受体2免疫排斥TH1TH2
