王琦
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省农垦总局科技攻关项目更多>>
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- 传染性鼻气管炎病毒gD基因表位的原核表达与纯化
- 2015年
- [目的]对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D基因表位进行原核表达,并对表达产物进行纯化鉴定。[方法]利用PCR扩增出g D基因3段表位即g D-A、g D-B、g D-C,并构建原核表达重组质粒p ET-28a-g D。将其转入BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达。表达的g D重组蛋白经亲和层析纯化后,进行Western blot分析。[结果]重组表达质粒p ET-28a-g D经PCR、双酶切及测序证明构建正确。SDSPAGE表明,g D蛋白在大肠埃希菌中高效表达,表达的重组蛋白相对分子量约48 ku,与预期的蛋白分子量一致。纯化后的g D重组蛋白浓度为0.128 mg/ml,免疫印迹结果显示纯化后的g D重组蛋白能与IBR标准阳性血清发生特异性反应,说明其免疫原性良好。[结论]成功表达了g D基因表位蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,可作为预防IBR基因工程亚单位疫苗的候选抗原。
- 王欣王琦齐晓雪毕莹倪宏波
- 关键词：IBRGD纯化亚单位疫苗
- 猪蓝耳病病毒、圆环病毒和沙门氏菌混合感染的实验室诊断被引量：8
- 2016年
- 随着养殖规模的不断扩大,猪群发病往往不是由单一病原所致,而是以两种或两种以上的病原相互协同作用所造成的。感染猪群常见的病原有猪瘟病毒、蓝耳病病毒、圆环病毒、沙门氏菌、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、副猪链球菌、巴氏杆菌和嗜血杆菌等,并经常发生几种病原混合感染的情况,导致猪群的高发病率和高死亡率,危害极大。本文通过对某猪场病死仔猪进行病理解剖和实验室诊断,确诊其为蓝耳病病毒、圆环病毒和沙门氏菌混合感染。
- 高琦王琦倪宏波
- 关键词：蓝耳病病毒圆环病毒沙门氏菌
- 产肠毒素性大肠埃希菌K99-987P-F41原核表达载体的构建、表达及其纯化被引量：3
- 2016年
- 目的构建产肠毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41原核表达载体,诱导表达后进行纯化。方法利用PCR技术,从ETEC基因组DNA中扩增出K99、987P、F41部分基因片段,将3段目的基因融合亚克隆至大肠埃希菌原核表达载体p ET30a(+),构建重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化。结果重组表达质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41经PCR、酶切及测序鉴定证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约60 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的63.8%,纯度为81.2%,浓度为8.953 mg/ml,可同时被天然和重组抗原多抗识别,具有良好的反应原性。结论 ETEC重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41可在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍离子亲和层析柱纯化可获得融合蛋白。
- 王欣王琦郎秀艳张洋龙倪宏波
- 关键词：原核表达纯化
