曹梦琪
- 作品数：10 被引量：31H指数：4
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- 青枯菌5号小种RTQ-PCR检测引物及方法
- 青枯菌5号小种RTQ‑PCR检测引物及方法，序列为：RS72F：5'‑ATGGATAAAGGGTTCGTGGTG‑3'；RS312R：5'‑CAGGCTCAGCGAGATTGC‑3'。本发明基于青枯菌5号小种区别于其他青...
- 吴福安曹梦琪包奇王俊张健盛晟
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- 青枯菌5号小种RTQ-PCR检测引物及方法
- 青枯菌5号小种RTQ-PCR检测引物及方法，序列为：RS72F：5'-ATGGATAAAGGGTTCGTGGTG-3'；RS312R：5'-CAGGCTCAGCGAGATTGC-3'。本发明基于青枯菌5号小种区别于其他青...
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- 基于实时荧光定量PCR技术检测桑丁香假单胞菌被引量：5
- 2016年
- 由桑丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae pv.mori,以下简称Psm)引起的桑疫病是一种毁灭性的桑树细菌性病害,建立对病原菌的早期检测技术,有利于及时制定病害的防控技术措施。依据致病性相关基因hrp Z的片段设计的一对引物能够在Psm中特异性地扩增出195 bp大小的条带,而用于对其他致病变种的丁香假单胞菌和其他种属病原菌的扩增则没有此条带。利用Psm14-7菌株基因组DNA为模板进行实时荧光定量PCR(q PCR)扩增,模板DNA质量浓度在6×10^(-5)~6 ng/μL范围内与扩增所得Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-3.224 69x+14.034 45(R^2=0.997 09),检测的最低限为(60±0.001 2)fg/μL;以Psm14-7菌液为模板进行q PCR,菌液浓度在1×10~2~1×10~8CFU/m L范围内与Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-4.562 15x+46.911 67(R^2=0.988 72),最低检测限为(10~2±0.008 3)CFU/m L。于桑树植株人工接种Psm后不同时间,对出现各种症状植株中的菌群数量进行q PCR检测,结果显示:接种后的第4~8天可能为病原菌诱导桑树的过敏性反应和系统获得性抗性关键时期,影响到了Psm的增殖速度;能引起健康桑树暴发桑疫病的致病菌最低浓度为(1.5×10~8±0.076 8)CFU/g。建立的q PCR检测方法,对由Psm引起的桑疫病的田间早期诊断和及时防控具有一定指导意义。
- 包奇曹梦琪周雨郑煜李长龙王海燕王俊王俊盛晟
- 关键词：桑疫病HRP实时荧光定量PCR
- 检测桑丁香假单胞菌的引物及其应用
- 本发明公开了一种检测桑丁香假单胞菌的引物及其应用，其正义引物Psm240F序列为：5ˊ-AAGGTAACGGGGCTAAT-3ˊ，反义引物Psm434R序列为：5ˊ-GCTGTTGACCGATGATAT-3ˊ。本发明基于...
- 吴福安包奇周雨曹梦琪王俊盛晟
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- 桑树青枯病病原菌的分离鉴定及其活体检测方法的建立
- 由青枯菌5号生理小种（Ralstonia solanacearumrace5）引起的桑青枯病是我国一种毁灭性的作物病害。由于缺乏有效的防控措施，因此早期诊断、尽早防控是控制该病害爆发流行的重要手段。本研究通过对采自广东发...
- 曹梦琪
- 关键词：桑树青枯病荧光定量
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- 基于qPCR技术快速检测青枯劳尔氏菌5号生理小种的方法被引量：3
- 2015年
- 由青枯劳尔氏菌（以下简称青枯菌）5号生理小种（Ralstonia solanacearum race 5）引起的桑青枯病是桑树的重大病害。采用荧光定量PCR（qPCR）技术对病原菌进行早期检测,为病害的预测预报及有效防控提供依据。从青枯菌差减基因文库筛选一对引物RS72F/RS312R,经PCR扩增试验及qPCR产物的熔解曲线分析验证其可特异性地扩增出青枯菌5号生理小种241 bp的基因片段。建立的qPCR标准曲线显示：以青枯菌5号生理小种基因组DNA为模板,在10-4~102 ng/μL范围内,DNA质量浓度的对数值与扩增Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-2.747x＋21.834,R2=0.993;以青枯菌5号生理小种菌液为模板,在103~107 CFU/mL范围内,菌液浓度的对数值与扩增Ct值呈现良好的线性关系,线性方程为y=-3.418x＋45.447,R2=0.998。应用建立的qPCR检测方法对经青枯菌5号生理小种菌液处理的土壤样品进行检测,结果显示可检测出自然环境中存在的低于致病浓度的病原青枯菌,且用菌液处理灭菌土壤和不灭菌土壤的样品间青枯菌检测的Ct值无显著差异。建立的检测方法具有特异性强、灵敏度高、可定量的特点,适用于由青枯菌5号生理小种引起的桑青枯病的早期检测诊断。
- 曹梦琪包奇杨采风王俊盛晟吴福安
- 关键词：荧光定量PCR桑青枯病
- 桑树根腐病真菌病原拮抗细菌JK-7的分离与鉴定被引量：5
- 2013年
- 桑树根腐病是一类土壤传染性桑树根部病害。为了实施对这类病害的生物防治,从桑树根际土壤分离到84株芽孢杆菌,通过对峙培养法从中筛选出一株对桑树根腐病真菌病原腐皮镰刀菌(Fusarium solani)FS-1具有拮抗作用的菌株,将该菌株编号为JK-7。JK-7菌株在LB培养基上的菌落呈半透明、光滑蜡状,边缘不规则;为革兰阳性菌,杆状,大小0.5～0.7μm×1.0～1.2μm,芽孢呈椭圆形,位于菌体中部或亚末端;菌株能利用淀粉与酪氨酸,伴孢晶体测定为阴性,接触酶反应为阳性。采用一对细菌通用引物PCR扩增获得JK-7菌株的16S rDNA基因序列,其片段大小为1 477 bp。系统进化树显示JK-7菌株与蜡样芽孢杆菌的亲缘关系最近。综合以上结果鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。平板对峙试验观察JK-7菌株对桑树根腐病真菌病原FS-1的菌丝生长有抑制作用,利用扫描电子显微镜可观察到JK-7菌株定殖在病原菌菌丝表面,可使病原菌菌丝生长畸形和菌丝体断裂,显示出对桑树根腐病真菌病原FS-1的拮抗作用。
- 张艳东曹梦琪王俊王凯旋孙国霞吴福安
- 关键词：拮抗细菌蜡样芽孢杆菌
- 检测桑丁香假单胞菌的引物及其应用
- 本发明公开了一种检测桑丁香假单胞菌的引物及其应用，其正义引物Psm240F序列为：5'‑AAGGTAACGGGGCTAAT‑3'，反义引物Psm434R序列为：5'‑GCTGTTGACCGATGATAT‑3'。本发明基于...
- 吴福安包奇周雨曹梦琪王俊盛晟
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- 桑园土壤中草甘膦残留检测方法被引量：11
- 2015年
- 文中建立了高效液相色谱法测定桑园土壤样品中草甘膦残留量的方法.通过考察柱前衍生、流动相等相关因素的实验条件，结合影响草甘膦检测精确度的单因素实验，确定了草甘膦的最佳柱前衍生高效液相色谱检测方法，并对该方法的准确性和精密度进行了验证.结果表明：草甘膦浓度在5.0-35.0μg/mL范围内，线性关系良好，相关系数（ R2）为0.9992.在0.1-1.0μg/g添加量范围内，桑园土壤中草甘膦的平均回收率为98.5%-103.0%，变异系数为3.54%-4.08%.本实验得到柱前衍生高效液相色谱法检测桑园土壤中草甘膦残留的方法回收率和精密度较好，可满足对桑园土壤草甘膦残留检测的要求.
- 王超赵永亮高敏陈茜包奇曹梦琪吴福安
- 关键词：草甘膦高效液相色谱柱前衍生
- 基于PMA-qPCR检测青枯菌5号生理小种活菌的方法被引量：8
- 2015年
- 青枯菌5号生理小种(Ralstonia solanacearum race 5)是引发桑青枯病的病原菌。为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足,建立叠氮溴化丙锭(PMA)预处理结合荧光定量PCR(q PCR)检测青枯菌5号生理小种活菌的方法。该方法首先将待检测样品的病原菌细胞用质量浓度为15 ng/μL的PMA暗孵育10 min后,在卤钨灯下曝光5min,以消除死菌细胞DNA的PCR扩增信号。用PMA-q PCR方法对含青枯菌5号生理小种活菌和死菌的混合样本的检测结果表明,死菌的存在不会对活菌细胞DNA的扩增产生影响。建立的PMA-q PCR标准曲线显示,在菌液浓度为103~107CFU/m L的范围内,qPCR循环阈值(Ct)与菌液浓度的对数值之间呈良好的线性关系,线性方程为y=-3.477x+47.489,R^2=0.997。建立的PMA-q PCR方法能更为准确地检测复杂样本中的青枯菌5号生理小种活菌数量,有助于对桑树青枯病的早期诊断和及时制定病害防控措施。
- 曹梦琪王旭东王俊盛晟吴福安
- 关键词：桑树青枯病活细胞
