- 一种基于纳米材料的血小板抗体检测方法和血小板保存方法
- 本发明涉及一种基于纳米材料的血小板抗体检测方法和血小板保存方法。本发明首次将血小板膜蛋白包裹PLGA制备的纳米级复合颗粒应用于血小板抗体检测，证实其以人来源的含抗血小板抗体的血清为检测对象，可准确检出血小板抗体，具有较好...
- 马勤勤陆萍朱慧君李睿书傅敏
- 组织血型抗原Le^(y)低表达的人巨核细胞系的建立和鉴定
- 2022年
- 目的应用CRISPR/cas9技术,建立血小板Le^(y)抗原差异化表达的人白血病巨核细胞系,为后续研究Le^(y)抗原在血小板活化中的作用奠定基础。方法选取人巨核细胞白血病细胞DAMI,用Western Blot及流式细胞法确定Le^(y)抗原的表达量;用实时定量PCR方法检测编码Le^(y)抗原合成相关的岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase,FUT)基因的表达,确定候选敲除基因,用CRISPR/Cas 9敲除候选FUT基因,使用流式细胞仪分选出Le^(y)抗原低表达的细胞群,培养细胞并鉴定Le^(y)抗原的表达量。用活细胞染色结合流式细胞法监测细胞增殖。结果DAMI细胞上具有大量的Le^(y)抗原表达;FUT1和FUT4在DAMI中有相对较高的mRNA表达,可能对Le^(y)抗原的表达起关键作用;敲除FUT1后的DAMI细胞系Le^(y)抗原的表达量与对照相比有显著降低,细胞增殖能力与野生型细胞相比没有显著改变。结论Le^(y)抗原的生物合成涉及多种FUT基因,对其中主要的FUT进行基因敲除无法彻底阻断Le^(y)抗原的合成,只能降低Le^(y)抗原的表达,本研究应用CRISPR/cas9技术敲除FUT基因建立的稳转人白血病巨核细胞系,为研究Le^(y)抗原对血小板功能的影响和意义奠定了基础。
- 朱慧君马勤勤赵俸涌李勤陆萍
- 关键词：血小板功能岩藻糖基转移酶基因敲除
- 人血小板血型的多重PCR检测方法及试剂盒
- 本发明提供了一种人血小板血型的多重PCR检测方法及试剂盒，所述试剂盒包含序列如SEQ ID NO:1‑23所示的引物，并记载有适当的PCR反应体系及反应条件，可用于对血小板血型抗原HPA1‑6、HPA15进行基因分型。本...
- 朱慧君陆萍傅敏李睿书
- 文献传递
- 组织血型抗原Lewis Y通过调控微管乙酰化水平促进细胞迁移
- 2020年
- 目的组织血型抗原Lewis Y(LeY)是血型抗原Lewis B的异构体,有报道其与细胞运动性及肿瘤转移高度相关。然而,尽管细胞骨架是细胞迁移的结构基础,LeY和细胞骨架之间的关系却不为人知。在本研究中,我们的目标是检查LeY对细胞运动性以及细胞骨架构建的作用,找出其中的效应分子。方法对乳腺癌细胞MCF-7和/或MDA-MB231进行以下处理:1)转染FUT1的过表达载体(pcDNA-FUT1),2)转染针对FUT1的特异性siRNA(siFUT1),3)用抗LeY-处理,通过Transwell试验和细胞划痕试验检测细胞迁移能力,对其中过表达FUT1的细胞用抗-乙酰化α-tubulin抗体进行Western Blot杂交或免疫荧光染色,观察微管乙酰化的变化。由于α-tubulin的乙酰化明确受到去乙酰化酶HDAC6的调控,使用HDAC6的特异性抑制剂Tubacin和广谱HDAC抑制剂TSA阻断HDAC6的作用后,再次检验FUT1过表达对细胞迁移的影响。结果 1)pcDNA-FUT1转染后细胞迁移能力增加,且Western Blot和免疫荧光染色结果都显示其α-tubulin的乙酰化水平降低,而siFUT1的转染及抗体阻断降低了细胞迁移能力;2)Tubacin或TSA处理后,乙酰化α-tubulin的形成受到强烈抑制,同时细胞迁移显著减少,而此时pcDNA-FUT1的转染对细胞迁移的影响相比处理前也有显著减少(P<0.01)。结论 LeY抗原对细胞迁移有显著正向影响,对微管蛋白α-tubulin的乙酰化的调控是机制之一,这一点为研究其他Lewis家族血型抗原提供了新的思路——对肿瘤患者进行输血治疗时,或许应该考虑到血型抗原作为肿瘤转移促进剂的意义,以降低输血潜在的风险。
- 朱慧君陆萍
- 关键词：细胞骨架去乙酰化酶细胞迁移
- HPA-1a抗体SPR技术定量检测方法的建立
- 2021年
- 目的:建立针对人类血小板抗原(HPA)-1a抗体的表面等离子体共振(SPR)技术定量检测方法。方法:以氨基偶联法在芯片表面偶联重组蛋白,采用SPR方法检测不同浓度的标准抗血浆样本,优化实验条件,在检测范围内绘制标准曲线,并分析其敏感性、特异性、准确性和精密度。结果:利用SPR技术建立针对HPA-1a抗体的定量检测方法,检测范围为0-20 IU,准确性(回收率)为97.75%-103.08%,批内精密度[变异系数(CV)]为3.53%-4.29%;批间精密度(CV)为2.08%-4.40%。特异性实验中,以不同的血小板膜蛋白单抗和含相应抗体的参比血浆进行检测,均未见明显阳性结果。结论:建立的针对HPA-1a抗体的SPR技术定量检测方法具有较高的敏感性、特异性、准确性和精密度,且操作简便快速,这为科研和临床相关抗体的检测提供了一种新的参考方法。
- 李睿书倪铭晨朱慧君马勤勤傅敏陆萍
- 关键词：人类血小板抗原表面等离子共振安全输血
- 一种基于纳米材料的血小板抗体检测方法和血小板保存方法
- 本发明涉及一种基于纳米材料的血小板抗体检测方法和血小板保存方法。本发明首次将血小板膜蛋白包裹PLGA制备的纳米级复合颗粒应用于血小板抗体检测，证实其以人来源的含抗血小板抗体的血清为检测对象，可准确检出血小板抗体，具有较好...
- 马勤勤陆萍朱慧君李睿书傅敏
- 文献传递
- MASPAT法及流式细胞术用于血小板交叉配合的方法比较
- 2019年
- 目的对使用MASPAT法及流式细胞术进行血小板交叉配合试验的结果进行比较分析,为寻找更精确高效的用于血小板配血方法提供依据。方法随机选取上海市各临床医院血小板输注无效患者,送检上海市血液中心检测中心进行血小板特殊配型的血样20份(2018年1月),用MASPAT试剂盒和流式法进行交叉配合试验。分别根据制造商说明书及荧光强度值(MFI)进行结果判读,统计反应结果;用MACE法鉴定结果差异大的样品中是否存在血小板相关抗体HLA-I类及血小板特异性HPA1a抗体。结果20份患者血清样品有7份与6名供者的结果在两种方法中完全一致。将不一致的结果分为两类,一类为MASPAT法阳性而流式法阴性,占80.00%;一类为MASPAT法阴性而流式法阳性,占20.00%。用MACE法鉴定其中差异数最多的4个血清样品,证明其中不含HLA-I和HPA-1a抗体。结论MASPAT法与流式法用于血小板交叉配合试验的结果之间平行性不高,其中MASPAT法的阳性预期较高;相比之下,流式法可以减少假阳性的出现;事实上,虽然二者结果差异较大,但在本研究中最终配合性血小板的选择上,符合率达到90.00%。在有条件的实验室,未来可能可以用流式法取代MASPAT方法进行血小板交叉配合试验。
- 朱慧君陆萍
- 关键词：流式细胞术
- MASPAT方法及流式细胞术用于血小板交叉配合的方法比较
- 目的对使用MASPAT法及流式细胞术进行血小板交叉配合实验的结果进行比较分析,为寻找更精确高效的用于血小板配血方法提供依据。方法随机选取上海市各临床医院血小板输注无效患者,送检上海市血液中心检测中心进行血小板特殊配型的血...
- 朱慧君陆琼陆萍
- 文献传递
- 人血小板血型的多重PCR检测方法及试剂盒
- 本发明提供了一种人血小板血型的多重PCR检测方法及试剂盒，所述试剂盒包含序列如SEQ ID NO:1‑23所示的引物，并记载有适当的PCR反应体系及反应条件，可用于对血小板血型抗原HPA1‑6、HPA15进行基因分型。本...
- 朱慧君陆萍傅敏李睿书
- 文献传递
- 基于酸处理的流式技术检测HPA-1a抗体
- 目的探讨流式细胞术联合酸洗脱去除HLA-Ⅰ抗原方法对HPA-1检测的影响。方法采用4℃预冷pH3.0的柠檬酸缓冲溶液于室温条件下处理血小板5 min后,与含有HPA-1抗体的WTO标准血清反应,经流式细胞术检测HPA-1...
- 马勤勤朱慧君李睿书傅敏陆萍
