田飞焱
- 作品数：9 被引量：49H指数：4
- 供职机构：华中农业大学水产学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家质检总局科技计划项目深圳出入境检验检疫局科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鱼类病毒性神经坏死病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其特性被引量：8
- 2008年
- 利用RT-PCR技术获得病毒性神经坏死病毒0603株的衣壳蛋白基因,将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacⅠ质粒中,构建了pFastBac-cp质粒。转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-cp,脂质体介导将其转染Sf9细胞产生有感染性的重组杆状病毒AcNPV-cp。利用AcNPV-cp感染Sf9细胞后,SDS-PAGE分析可见大小约为37ku的特异性蛋白带,Western-blotting分析发现,其可以与病毒性神经坏死病毒阳性血清反应出现特异性的杂交带。试验结果表明,AcNPV-cp在Sf9细胞中成功地表达了病毒性神经坏死病毒的衣壳蛋白,其具有良好的免疫学活性。负染电镜观察发现,CP蛋白可自行装配成病毒样颗粒,其大小形态类似于病毒性神经坏死病毒。制备超薄切片后电镜观察发现,CP蛋白自行装配成的病毒样颗粒呈晶格状排列在细胞质中。为研制有效防控鱼类病毒性神经坏死病的新型颗粒性疫苗奠定了基础。
- 罗卫田飞焱刘荭陈焕春李惠芳刘宗晓王侃蔡伊娜吕建强
- 关键词：衣壳蛋白病毒样颗粒
- 鱼类神经坏死病病毒衣壳蛋白基因分析及其真核表达
- 鱼类病毒性神经坏死病/(virus nervous necrosis,VNN/)的病原为鱼类神经坏死病毒,它属于诺达病毒科/(Nodaviridae/)中的β-诺达病毒属。自80年代报道以来,目前该病毒引起的疾病在除非洲...
- 田飞焱
- 关键词：衣壳蛋白基因蛋白表达
- 文献传递
- 鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用被引量：9
- 2008年
- 根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法。利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒,结果只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.2pg/μL的总RNA。与RT-PCR的灵敏度对比试验表明,其敏感度比RT-PCR高100倍。对同一样品进行检测,在组内及组间的变异系数分别为0.9%以及1.5%,证实其重复性极好,并且从抽提核酸到得出结果仅需4h。对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测,结果发现有40份阳性样品。这些结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高的优点,是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具。
- 罗卫李惠芳刘荭陈焕春范万红刘宗晓田飞焱王侃吕建强
- 关键词：实时荧光RT-PCR
- “天辰水产专用液体肥”对养殖池塘中浮游生物种群结构的影响
- 2007年
- “天辰水产专用液体肥”是一种高浓度多元素复合液体肥料。该产品的水溶性好，并具有组分含量高和养分利用率高的特点。因为浮游生物的种类、数量、生产量是评价水体营养类型和生产潜力的重要指标。我国池塘养殖水体“肥、瘦”主要是根据浮游生物的种、量来判断的。为了深入探讨这种“天辰水产专用液体肥”对水产养殖水体中浮游植物种群变化动态的影响，特进行本研究。
- 田飞焱陈昌福
- 关键词：浮游生物养殖池塘水产群结构养分利用率
- 急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌实时荧光RPA快速检测方法的建立
- 2024年
- 为建立一种简单、快速的急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)检测方法,本研究根据pirB基因保守序列设计了多组引物和exo探针组合,经过筛选优化,建立了VpAHPND实时荧光RPA检测方法。结果显示,该方法在42℃恒温反应15 min即可快速、特异性地检测出急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND),与其他虾类病原和养殖环境中的致病菌不发生交叉反应,最低菌体细胞检出浓度为3.8×10^(2)CFU/mL,质粒检测限为1.17×10^(1)copies/μL,且具有良好的重复性。利用本研究建立的实时荧光RPA方法与WOAH推荐的实时荧光qPCR方法对50份人工感染的南美白对虾样品进行检测,二者检测结果一致。结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,反应灵敏,仪器依赖性低,结果可靠,适用于实验室和现场对VpAHPND快速检测。
- 田飞焱田飞焱裴建明黄海莉徐节华顾泽茂顾泽茂吴葵
- 关键词：副溶血弧菌
- 致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌RAA-LFD快检方法的建立
- 2023年
- 为建立一种简单、快速的现场检测致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的方法,根据VpAHPND pVA1质粒pirB基因保守序列设计RAA-nfo特异性引物和探针,建立了VpAHPND核酸RAA-LFD检测方法。该方法特异性强,仅对VpAHPND特定毒力株核酸检测为阳性,与副溶血弧菌非毒力株、霍乱弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病病毒(IHHNV)、十足目虹彩病毒(DIV1)、虾肝肠胞虫(EHP)等病原核酸无交叉反应;灵敏度高,最低可检测到3.8×10^(2) CFU/mL的菌体细胞,质粒检测限为1.17×10^(1) copies/μL;检测时间短,37℃恒温反应20 min,以LFD显色5 min后即可完成结果判定;同时该方法具有良好的重复性和可信度,利用该方法和世界动物卫生组织(WOAH)推荐的qPCR方法平行检测58株副溶血弧菌分离株,二者符合率为100%。结果表明,本研究建立的RAA-LFD方法特异、灵敏、反应快速、操作简单且结果肉眼可视,适用于VpAHPND的现场快速检测。
- 田飞焱田飞焱黄海莉孟霞裴建明刘文珍张锦波李小勇周文华顾泽茂顾泽茂
- 关键词：副溶血弧菌
- 虹彩病毒蛙病毒属病毒实时荧光PCR检测方法的建立被引量：16
- 2008年
- 在GenBank中搜寻虹彩病毒蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)基因序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列,设计引物和Taqman探针,建立了虹彩病毒蛙病毒属实时荧光PCR检测方法。对荧光PCR反应条件进行优化,评估该检测方法的特异性、稳定性和重复性,利用10倍系列稀释法检验其灵敏度并与常规PCR做了比较。结果显示,该方法对虹彩病毒蛙病毒属成员(新加坡石斑鱼虹彩病毒除外)的检测有高度的特异性,与淋巴囊肿病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒等其他水生动物病毒之间均无交叉反应,有良好的特异性,检测总DNA灵敏度为4.5×10-3pg/μL,比传统PCR的敏感度高出100倍,可对低病毒含量的样品进行准确检测。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.9984。组内和组间重复试验的Ct值标准偏差分别为1.2%和1.6%,有良好的重复性。与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品等优点,可用于出入境检疫和动物防疫监督部门对虹彩病毒蛙病毒属的疫情监测。
- 李惠芳吕建强岳志芹刘荭田飞焱何俊强蔡依娜陈昌福
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 6株鱼类病毒性神经坏死病病毒cp基因的分子特征和遗传发生分析被引量：2
- 2008年
- 根据已报道的鱼类病毒性神经坏死病毒（viral nervous necrosis virus,VNNV）衣壳蛋白基因（coatprotein gene,cp基因）设计引物,对2006年从我国沿海养殖石斑鱼中分离到的6株鱼类神经坏死病毒进行RT-PCR扩增,特异性扩增出6株病毒的完整衣壳蛋白基因,分别连接到pMD18-T载体中,并进行序列测定和分析。结果发现,6个VNNV分离株的cp基因核苷酸序列的同源性在97.3%以上;推导的氨基酸序列同源性在79.6%～99.1%之间。根据cp基因核苷酸序列绘制分子进化树,发现6个VNNV分离株在进化树同一分枝上,属于RGNNV基因型,与已报道的点带石斑鱼神经坏死病病毒（ECNNV）、巨石斑鱼神经坏死病病毒（ET-NNV）及玛拉巴石斑鱼神经坏死病病毒（MGNNV）亲缘关系较近。试验结果表明,目前我国沿海养殖场发生的鱼类病毒性神经坏死病均由同一来源的病毒引起,该基因型的鱼类神经坏死病毒在我国沿海养殖的石斑鱼中广泛传播流行。
- 田飞焱吕建强刘荭李惠芳刘宗晓陈昌福
- 关键词：衣壳蛋白基因
- TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒被引量：15
- 2008年
- 根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰（Ictalurus Punctatus）病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10~3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系（r=0.998 3）,最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。
- 李惠芳刘荭吕建强蔡依娜田飞焱李香平岳志芹陈昌福
- 关键词：实时荧光定量PCR
