董梅
- 作品数：17 被引量：32H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 炭疽AVA疫苗特异性抗体分泌细胞检测方法的建立被引量：1
- 2007年
- 目的 应用酶联免疫斑点（ELISPOT）技术,建立一种检测炭疽AVA免疫后特异性抗体分泌细胞的方法,用于检测和评价炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体形成细胞的功能.方法 无菌分离小鼠脾细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体分泌细胞的参数：包括抗原最佳包被浓度、细胞最适孵育时间、反应体系中细胞浓度以及亲和素抗体工作浓度的确定,同时检测上清中抗体效价,并以不相关抗原包被,检验方法的敏感性和特异性.结果 当抗原包被浓度为7.5μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定 细胞数为5×10^6/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数 且在抗体稀释度相同情况下,脾细胞孵育时间为3～6 h所获得的斑点数最清晰,背景着色最浅,容易被仪器识别 同时,特异性抗原包被组所获得的斑点频数高于无关抗原包被组（P＜0.01） 反应体系上清中未检测到抗原特异性抗体.结论 该方法敏感、特异,可用于AVA抗原免疫后体液免疫评价.
- 吕进张松乐董梅何蕊江海燕张良艳邢丽杨海荣王希良
- 布鲁杆菌基因工程疫苗免疫保护效率的初步观察被引量：6
- 2006年
- 目的比较布鲁杆菌6种抗原表位所获得的基因工程疫苗的免疫保护效率。方法布鲁杆菌核糖体蛋白L7/L12、胞质蛋白P39、细胞表面蛋白BCSP31、二氧四氢喋啶合成酶BLS、16.5×103的外膜蛋白PAL和翻译起始因子IF3的基因片段与真核表达载体pcDNA3.1(+)构建的核酸疫苗及上述6条片段转入pET32a(+)后诱导表达的的重组蛋白免疫小鼠,3次免疫后进行攻毒实验,对其免疫保护效率进行初步观察。结果L7/L12和BLS的重组蛋白疫苗和核酸疫苗都产生了非常显著的保护作用,P39的核酸疫苗、IF3和BCSP31的重组蛋白疫苗也产生了非常显著的保护作用,其中L7/L12核酸疫苗的保护效率最高。结论初步认为布鲁杆菌的优势抗原表位所获得的基因工程疫苗可产生一定的抗布鲁杆菌作用,可作为未来布鲁杆菌新型疫苗的候选者,有进一步研究的价值。
- 高永辉张松乐曾政罗德炎张良艳董梅王希良
- 关键词：基因核酸
- 炭疽芽孢杆菌致病机制与疫苗研制策略研究进展被引量：4
- 2006年
- 炭疽杆菌致病过程包括芽孢发芽、菌体繁殖和毒素分泌等多个环节。荚膜和毒素是公认的致病因子。毒素B亚单位(PA)可阻断ET、LT的致病作用,已用作疫苗,但繁殖体生长过程中产生的出血、蛋白溶解分子也是毒力分子。相应的抑制剂有治疗作用。现有炭疽粗制PA苗、芽孢苗安全有效,但仍存在不足。根据炭疽致病机制的研究进展,理想炭疽疫苗应同时靶向芽孢、荚膜和毒素及其他毒力因子等多个环节。
- 董梅王希良庄汉澜
- 关键词：炭疽炭疽芽孢杆菌致病机制疫苗
- 炭疽疫苗免疫小鼠外周血T_H2,T_H1和浆细胞免疫应答动态观察
- 2008年
- 为了深入了解炭疽两种疫苗——A16R芽孢苗与炭疽无菌培养滤液佐剂吸附苗(anthrax vaccine adsorbed,AVA苗)诱导小鼠免疫应答类型的差异,筛选疫苗免疫评价有效的免疫学参数,分别从抗体及细胞应答水平上对炭疽两种疫苗免疫Balb/C小鼠后免疫应答产生过程进行了动态观察.抗体检测结果分析显示,A16R芽孢苗免疫小鼠血清中可同时检测到抗芽孢抗体与抗AVA抗体,AVA免疫可诱导小鼠产生高效价的抗AVA抗体;两种疫苗免疫小鼠血清IgG抗体亚型均以IgG1和IgG2b为主,A16R免疫组IgG2a明显高于AVA免疫组.细胞应答结果分析显示,两种疫苗免疫外周血中均可检测到抗原特异性的TH2,TH1和浆细胞应答.TH2应答于免疫后5天即可在外周血中检测到,至观察末期仍可维持在较高水平;TH1应答,A16R免疫组出现早于AVA免疫组,免疫后5天即可检测到,AVA免疫组于二次免疫的7天才出现,观察末期两组均可检测到低水平的TH1应答;两种疫苗免疫小鼠外周血中均可检测到抗原特异性的浆细胞,A16R免疫组出现早,维持时间长,至观察末期仍呈现上升趋势,AVA免疫组,浆细胞出现较晚,维持时间较短,观察末期仅检测到低水平的浆细胞.上述结果表明,多抗原刺激物的A16R芽孢苗较AVA能更有效的诱导细胞免疫应答;炭疽疫苗免疫后小鼠外周血中TH2,TH1和浆细胞细胞应答,可以同抗体一起,作为疫苗有效性的免疫评价指标.
- 吕进何蕊董梅张良艳王希良
- 关键词：免疫应答酶联免疫斑点抗体分泌细胞
- 鼠疫耶尔森氏菌核酸疫苗的构建及其免疫学评价被引量：3
- 2005年
- 目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒加GMCSF免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果。结果F1和V均在COS7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体,pVAX1/V所诱导的抗体水平比pVAX1/F1高;通过抗体亚型分析、细胞因子和CD分子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并且均具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。
- 韩岳王希良何凤田摆茹董梅赵光宇王英曾政
- 关键词：鼠疫杆菌F1抗原DNA疫苗免疫应答
- 口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究被引量：3
- 2007年
- 目的构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础。方法将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达。以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平。结果构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生。结论构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础。
- 郭习勤焦新安王栋董梅邢丽颜艳何维明王希良
- 关键词：鼠疫耶尔森菌鼠疫DNA疫苗伤寒沙门菌
- 逆转录病毒—从实验小鼠外周血浆细胞中检出
- 2006年
- 应用超薄切片透射电镜技术在实验Balb/C小鼠外周血浆细胞中意外地检出逆转录病毒。病毒粒子有包膜,呈球形,直径约100 nm,包膜表面有纤突,病毒核衣壳在粗面内质网内膜上芽生成熟。该病毒被疑为小鼠体内的潜在性感染,应该引起实验动物生产部门的关注。
- 杨怡陈德蕙董梅庄汉澜
- 关键词：BALB/C小鼠逆转录病毒电镜
- 高致病性人禽流感H5N1疫苗滴鼻免疫应答效果的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的通过高致病性人禽流感H5N1全病毒-MF59佐剂疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价该疫苗所诱导的系统免疫与黏膜免疫应答效果。方法以不同剂量抗原按比例与MF59佐剂配伍制成粘膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,二免2周采血检测血清IgG、IgM效价及血清中HAI(HAinhibitor)的中和抗体效价,同时收集鼻、肺灌洗液,检测其IgG和sIgA抗体效价。结果H5N1+MF59组血清抗体效价较H5N1组有显著升高(P<0.01);在各剂量组中,随着剂量的增加抗体效价呈上升趋势,12μg后抗体效价呈下降趋势,以H5N1+MF59(12μg)组效价最高;肺鼻灌洗液中,均可检测到特异性分泌型IgA、IgG,其中特异性分泌型IgA效价略高于IgG;抗体亚型的分布以IgG1、IgG2b为主。结论灭活高致病性禽流感全病毒H5N1在佐剂MF59作用下可诱导机体产生体液免疫应答,同时还可以在黏膜局部产生特异性分泌型IgA、IgG,为高致病人禽流感病毒H5N1黏膜疫苗的研制奠定了基础。
- 何蕊吕进张良艳董梅王希良
- 关键词：滴鼻免疫免疫应答
- tPA信号肽和鼠疫杆菌保护性抗原V融合基因的构建及免疫效果鉴定被引量：3
- 2006年
- 获得含有鼠疫杆菌V抗原编码基因以及tPA信号肽编码序列的重组质粒,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。采用PCR扩增鼠疫菌杆菌V基因构建到pVAX1质粒中产生pVAX1/V重组质粒,PCR扩增tPA信号肽编码序列片段并将其插入到pVAX1/V中V基因的上游,构建tPA-pVAX1/V重组质粒;转染COS-7细胞,免疫细胞化学方法鉴定V蛋白的表达;二重组质粒分别加mGM-CSF质粒免疫BALB/c小鼠,观察免疫应答反应;以400个LD50强毒鼠疫杆菌皮下攻击免疫小鼠观察保护效率。结果显示,tPA-pVAX1/V在COS-7细胞中表达了V蛋白;免疫小鼠血清产生了特异性抗体和细胞免疫应答;攻毒保护率达80%。成功构建了分泌型V蛋白的真核表达质粒载体,具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,对强毒鼠疫杆菌攻毒有一定的保护效力,为鼠疫杆菌新型疫苗研制奠定了基础。
- 韩岳王希良董梅邢丽赵光宇摆茹
- 关键词：鼠疫杆菌DNA疫苗
- 炭疽杆菌培养上清液抗原的制备及免疫保护效果测定被引量：4
- 2006年
- 目的制备炭疽培养上清液抗原并对其免疫效果进行测定。方法将炭疽A16r菌种接种于培养基中培养,收集无菌滤液,并进行超滤浓缩,经Al(OH)3佐剂吸附后,皮下免疫Balb/c小鼠,用炭疽Vollum(s)强毒株腹腔攻击测定其免疫效力。结果制备出具有高保护性的上清液抗原,9 h产物对Balb/c小鼠免疫效果良好(94.4%)。结论本研究为进一步研究炭疽疫苗免疫保护机制和炭疽疫苗改进研究打下基础。
- 董梅马丽娟张松乐张良艳郭习勤邢丽杨海荣王希良
- 关键词：炭疽杆菌培养上清液
